Nous derivats de flavanols a partir de subproductes vegetals. Síntesi, purificació i avaluació de la seva capacitat anti-radicalària i pro-apoptòtica en cèl·lules no tumorals i canceroses.

Abstract

[spa] Se han obtenido una serie de conjugados de flavanoles a partir de un extracto vegetal mediante un proceso de despolimerización ácida en presencia de derivados de cisteína. Los monómeros de flavanoles derivatizados se separaron eficientemente del crudo de extracción mediante cromatografia de intercambio iónico en medio ácido, debido a la carga neta introducida al derivatizar. Posteriormente fueron purificados por cromatografia en fase reversa C18 obteniendo los correspondientes derivados de epicatequina, catequina y epicatequin 3- O -galato conjugados con L-cisteína, O -etilcisteína y N -acetilcisteína. Dichos compuestos presentaron una mayor capacidad antiradicalaria que la correspondiente epicatequina mediante ensayos con los radicales libres DPPH (el cual se reduce via donación de hidrogenos y/o por transferencia electrónica) y el nuevo radical estable HNTTM sintetizado en el Departamento de Materiales Orgánicos Halogenados del IIQAB-CSIC (el cual se reduce solo por transferencia electrónica). Todos los compuestos conjugados presentaron una mayor capacidad antiradicalária que el monómero de epicatequina y los compuestos que contenian el éster de galato fueron los que generaron una mayor capacidad antiradicalária en ambos estudios. También se realizaron estudios in vitro con líneas tumorales humanas de melanoma (A375 y M21) y de colon (HT29) y con una línea no tumoral de queratinocitos humanos (HaCaT), observándose una moderada inhibición en la viabilidad celular, siendo los compuestos que contenian un éster galato los que presentaron mayor efectividad. A nivel de ciclo celular, solo los derivados que contenian el éster galato presentaron una alteración en el ciclo a concentraciones dobles de su respectiva IC50, con un aumento de la distribución en la fase S. Igualmente se observó una inducción en la apoptosis en las linias tumorales tratadas con los compuestos (siendo los conjugados con el éster galato los que presentaron una mayor inducción), pero no en la linea no tumoral de queratinocitos. Dicha inducción a la apoptosis se corroboró con otras técnicas en las que se observó condensación de cromatina y la fragmentación del ADN. Sorprendentemente, uno de los derivados que contenia un éster de galato no presentó alteración en el ciclo celular ni indujo apoptosis en las células tumorales. Igualmente, su poder antiradicalario mediante transferencia electrónica (HNTTM) fue inusitadamente bajo aun conteniendo el grupo galato. Con dichos resultados se hipotetizó la posible relación entre la transferencia electrónica y su efecto en la maquinaria celular. Asimismo, el radical estable HNTTM nos permitiria predecir de forma sencilla la capacidad pro-apoptótica de los compuestos según su capacidad de transferencia electrónica.

[eng] It has been obtained a serie of flavanol conjugates from grape byproduct through acid depolimerisation with cysteine derivatives. The conjugates were separated efficiently form the crude extract using ion exchange chromatography. The conjugates of epicatechin, catechin and epicatechin 3-O-gallate with L-cysteine, O-ethylcysteine and N-acetylcysteine were purificated by reverse phase chromatography. These conjugates showed an enhanced antiradical power using the free radical DPPH (through electron transfer and/or hydrogen atom donation) and the recently synthetized free radical HNTTM (reduced only by electron transfer). All the conjugates showed higher antiradical power than the monomeric epicatechin and the conjugates containing the gallate group were the most active compounds against free radicals. Studies about tumoral human melanoma (A375 and M21) and adenocarcinoma (HT29) cell lines and non-tumoral keratinocyte cell line (HaCaT) were also performed. It was observed a moderate effect in cell viability inhibition, being the conjugates containing the gallate group the most effective ones. Regarding cell cycle, only the conjugates containing the gallate group showed S-phase arrest to concentrations double of its IC50. Moreover, it was observed an induction of apoptosis in the tumoral cell lines treated with the conjugates, but not in the keratinocyte cell line. Surprisingly, just only one of the conjugates containing a gallate group showed a normal cell cycle distribution and it did not induce apoptosis to the tumoral cell line. Thus, its antiradical power agaisnt HNTTM (electron transfer) was lower than expected for a galloylated compound. With these results, a possible relationship between electron transfer and the cellular mechanism was proposed.