Anàlisi de l'expressió de NOR-1 en les cèl·lules musculars llises i de la seva implicació en la proliferació cel·lular

Abstract

[cat] Dado que las células musculares lisas vasculares (CMLV) juegan un papel clave en el desarrollo de la aterosclerosis, conocer los genes que regulan la proliferación y migración de estas células pude conducir a encontrar nuevas dianas farmacológicas para tratar esta patología. Nosotros descubrimos que el receptor nuclear huérfano NOR-1/NR4A3 se encuentra expresado en CMLV estimuladas con suero y distintos mitógenos. Entre los componentes del suero cabe destacar como principal inductor de NOR-1 las lipoproteínas de baja densidad (LDL) y en menor medida las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL). Por otra parte, distintos factores de crecimiento en especial la trombina y el PDGF, ambos generados en eventos trombóticos, también inducen la expresión de este origen. Los mecanismos moleculares que regulan este proceso son complejos; participan proteínas G sensibles a la toxina pertusis, incrementos en la concentración citosólica de calcio y activación de distintas proteínas quinasas como la PKC, la PKA y MAPKs como la ERK y la p38 MAPK. Estas quinasas pueden activar directa o indirectamente (dependiendo del tipo y contexto celular), al factor de transcripción CREB. Nosotros observamos por primera vez que las LDL son capaces de inducir la activación de CREB y que este mecanismo es dependiente tanto del calcio como de la PKC. CREB se une al promotor de NOR-1 mediante su interacción con tres cajas CRE; además CREB es esencial en la actividad de este promotor, tal como analizamos mediante la cotransfección de un dominante negativo de CREB así como eliminando las cajas CRE por mutagénesis dirigida. Para evaluar el papel de NOR-1 en la proliferación celular, usamos oligodeoxinucleótidos (ODN) antisentido para inhibir la expresión de este gen. Analizamos de manera independiente dos ODN los cuales disminuyen de forma específica a la expresión de NOR-1. En estas condiciones, estos ODN inhiben la síntesis de DNA inducida tanto por el suero como por las LDL. Además, mediante citometría de flujo in vitro de reparación tisular, el bloqueo de la expresión de NOR-1 produce una inhibición de la capacidad de las células para recuperar el área dañada. De todos estos resultados se pude concluir que NOR-1 regula la proliferación de las CMLV y que por tanto podría ser una nueva diana terapéutica en las patologías en que este involucrada una excesiva proliferación de estas células.