Detección de células epiteliales en ganglios linfáticos mediante RT-PCR. Análisis de la eficacia de distintos métodos en diagnóstico de ganglios centinelas en cáncer de mama.

Abstract

[spa] La metástasis ganglionar constituye el factor pronóstico más importante en el cáncer de mama. La técnica del ganglio centinela se ha convertido en la opción de elección para el exámen del estado axilar, permitiendo evitar las complicaciones que provoca la linfadenectomía en un gran número de pacientes.La posibilidad de centrar el estudio de la axila en uno o pocos ganglios, en vez de los 10-30 de la disección axilar, ha permitido el empleo de técnicas moleculares que de otro modo hubieran resultado poco costo-efectivas en la rutina diagnóstica.El objetivo de esta tesis es evaluar si la utilización de la técnica de la RT-PCR es un método más sensible y costo eficaz en la detección de células circulantes y micrometástasis que el exámen rutinario histopatológico del ganglio centinela en pacientes con cáncer de mama.El estudio se ha realizado sobre una muestra total de unos 795 ganglios centinela, de paciencia diagnosticadas y tratadas en el HUB. Todos los ganglios fueron analizados mediante: Hematoxilina-eosina, cortes seriados e inmunohistoquímica (Cam 5.2), y RT-PCR (Citoqueratina 19).En este estudio se han analizado las distintas técnicas de RT-PCR, clásica y cuantitativa (Real-Time), se han comparado distintas plataformas Real-time y distintos tipos de normalización de datos.También se ha comparado la incidencia de positividad de la RT-PCR en la detección de células epiteliales frente la inmunohistoquímia. Además, se ha relacionado los resultados de expresión de citoqueratina en cada uno de los grupos con las características biológicas de los tumores: Tamaño tumoral, tipo histológico, multicentricidad o bilateralidad, permeación vascular, grado tumoral, estado de los receptores hormonales, expresión de Ki67 y expresión/amplificación del HER2/neu en los casos que se dispone. Así mismo se ha comparado la afectación ganglionar con otras características como: la clasificación molecular de los tumores y clasificación de riesgo de St. Gallen y se ha realizado el estudio estadístico univariado y multivariado.Finalmente, se ha realizado una evaluación comparativa del coste-efectividad de los distintos métodos utilizados.

[eng] The axillary node metastases has become a key prognostic factor for breast cancer. It is a powerful predictor of recurrence and overall patient survival. It is also used to determine systemic adjuvant treatment. The technique of Sentinel Node Biopsy (SNB) has had a major impact in the field of the surgical and staging breast cancer. It is a sensitive and specific method for predicting the status of the regional lymph nodes, furthermore, decreased morbidity is seen in comparison to that of routine level I-II axillary lymph node dissection. The sentinel node biopsy offers the opportunity on focusing on the examination of just a few lymph nodes and making it possible to use molecular techniques like reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). The objective of this thesis is to evaluate the use of molecular techniques and comparing the results with histopathological standard evaluation. In this thesis, results from the analysis of 795 patients from Hospital Universitari de Bellvitge with routine haematoxilin-eosin slide preparation, immunohistochemistry and RT-PCR were evaluated. Also, the correlation between molecular diagnostics and standard clinic-pathological prognostic factors like: tumour size, histological grade, vascular invasion, expression of hormonal receptors and KI67 and HER2/neu status and St. Gallen risk category were compared.