Analysis of Ly-6Chigh CD1lb+ monocytes generated in vitro iniflammatory animal models / Análisis de monocitos Ly-6Chigh CD11b+ generados in vitro en modelos animales de inflamación

Abstract

[spa] Monocitos circulantes proporcionan una defensa contra las infecciones y también a enfermedades autoinmunes. Recientemente dos tipos de monocitos fueran identificaron en la sangre periférica de ratones. El monocito ¿residente¿ con fenotipo CD11b+CCR2lowLy-6ClowCX3CR1high, que migran a tejidos no lesionados y se diferencian en macrófagos residentes y células dendríticas (DC). En contraste, un subconjunto distinto conocido como monocitos ¿inflamatorios¿, con un fenotipo CD11b+CCR2highLy-6ChighCX3CR1low son células que migran al tejido infectado y en lo cual contribuye al desarrollo de la inflamación. Monocitos Ly-6Chigh, el objetivo de nuestro trabajo, representan un 2-5% de los monocitos del torrente sanguínea de los ratones. Dado que estas células son de difícil obtención y que la cantidad obtenida de la sangre de ratones es muy baja, nuestro grupo desarrolló un nuevo sistema para generar monocitos Ly-6Chigh in vitro a partir de médula ósea de ratón, con el objetivo de estudiar sus funciones in vivo en dos modelos animales de inflamación. Nuestro laboratorio ha optimizado dos modelos animales capaces de inducir inflamación local en ratones Balb/c, inmunocompetentes. En el primer modelo, 1-fluoro-2 ,4-dinitrobenceno (DNFB) se aplicó tópicamente en la oreja derecha para crear en la piel condiciones que inducen la migración de estas células para el sitio de la irritación (modelo DNFB). En este modelo de piel, la inflamación en la oreja fue calculada atreves del peso neto, donde el peso de la oreja izquierda es restado del peso de la oreja derecha después de 24h y 48h de la inyección intravenosa (iv) de los monocitos Ly-6ChighCD11b+ en los ratones. En el segundo modelo, la inflamación es inducida atreves de la aplicación de una inyección de Notexin en el tibial anterior (TA) de la pierna derecha del animal la cual induce una inflamación muscular (modelo Notexin). Finalmente en ambos modelos, monocitos Ly-6ChighCD11b+ generados in vitro pre-tratados in vitro con citocinas pro- o anti-inflamatoria (IFN-¿ o IL-4) o no tratados, fueran inyectados iv en la colas de los ratones. Por otra parte, expresión génica fue medida mediante PCR cuantitativa en tiempo real, la migración celular fue evaluada in vivo atreves de imágenes realizadas por el equipo de IVIS, estudios de citometría de flujo y ensayos de histología también fueran realizados para evaluar la función de las células Ly-6Chigh en el sitio de inflamación.

[eng] The immune system must detect a wide variety of agents, from viruses to parasitic worms, and distinguish them from the organism's own healthy tissue. However, the immune system needs to be well regulated since a disorder in an immune response can result in autoimmune diseases, tissue destruction, inflammatory diseases and cancer. Within the context of innate immunity, the mononuclear phagocyte system, cells comprising bone marrow progenitors, blood monocytes and tissue macrophages is acquiring great importance in the study of different pathologies and particularly the monocytes/macrophage functions. In this regard, recent studies demonstrate that monocytes present a heterogeneous population of innate cells. Monocyte was found leading to distinct cell populations with various subtypes with distinct functions. Two types of monocytes were identified in mice. Resident monocytes, with a CD11b+CCR2lowLy-6ClowCX3CR1high phenotype, migrate to uninjured tissues after emigration from bone marrow and differentiate into resident macrophages and dendritic cells. In contrast, a distinct inflamed monocyte subset with a CD11b+CCR2highLy-6ChighCX3CR1low phenotype infiltrates infected tissue and contributes to the development of inflammation. Currently, all studies performed with monocytes are done in transgenic models (i.e. CCR2-/-; GPF-CX3CR1 models) or with expensive techniques to study and acquire the maximum number of cell possible from mice blood. Monocytes constitute around 2% (100cells/μl) of the total peripheral blood leukocyte pool in mice, where only 1-5% are Ly-6Chigh monocytes. What makes difficult to study it.