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Linfoma de células grandes B: Caracterización genética y utilidad en el diagnóstico y pronóstico de la biopsia líquida

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Universitat de Barcelona. Facultat de Medicina i Ciències de la Salut

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[spa] El linfoma difuso de células grandes B (LDCGB) es una neoplasia con gran
heterogeneidad clínico-biológica y es el síndrome linfoproliferativo más frecuente en el
mundo occidental y el paradigma de linfoma agresivo, representando el 25-35% de los
casos.
El linfoma de células B primario de mediastino (LPM) es un linfoma agresivo que
representa del 2 al 3% de los casos de linfoma. Inicialmente se consideró un subtipo
de LDCGB, pero debido a sus características clínico-patológicas distintas, actualmente
es reconocido como una entidad distinta.
La utilización de tecnologías basadas en secuenciación de nueva generación (NGS) ha
permitido explorar la utilidad del DNA circulante tumoral (ctDNA) como marcador
pronóstico y para la detección y caracterización genética de diferentes neoplasias,
entre ellos los linfomas. Esta opción es particularmente útil cuando no se dispone de
una muestra de biopsia del tumor para el análisis molecular.
El objetivo de los dos primeros trabajos fue analizar el perfil mutacional de pacientes
con LDCGB y LPM en el momento del diagnóstico y correlacionar los niveles de ctDNA
con las variables clínicas iniciales, la respuesta terapéutica y la supervivencia de los
pacientes.
En el primer trabajo se incluyeron 100 pacientes con LDCGB de forma prospectiva
entre 2016 y 2019. Se obtuvo una muestra de plasma al diagnóstico y previo al inicio
del tratamiento. Se pudo realizar la determinación del perfil mutacional en 79
pacientes (H/M 42/37; edad mediana 63 años) detectando al menos una mutación en
69 de los casos (87.3%). A partir del perfil mutacional del ctDNA se pudo clasificar a
los pacientes de acuerdo con los grupos genómicos descritos recientemente utilizando
la herramienta LymphGen.
La sensibilidad del ctDNA para detectar mutaciones en las muestras de FFPE basales
fue del 69% (IC95%: 64,1-73,9). Los niveles más elevados de ctDNA (definido como
>2.5 log hGE/mL) se correlacionaron significativamente con la presencia de síntomas
B, niveles séricos elevados de LDH, β2-microglobulina, estadio IV de Ann Arbor y con
IPI de riesgo intermedio-alto o alto (P < 0.05 en todos los casos). En el grupo de
pacientes tratados con intención curativa, aquellos con niveles elevados de ctDNA
pretratamiento tuvieron una tasa de respuesta completa (RC), supervivencia libre de
progresión (SLP) y supervencia global (SG) significativamente más bajas que aquellos
con niveles bajos (tasa de RC, 65% frente a 96%, P < 0.004; SLP a los 24 meses de
73 vs. 100%, P= 0.016; y SG a 24 meses de 100 vs. 73%, p = 0.001).
Además, se evaluó el volumen metabólico tumoral (VMT) y la glicolisis total de la
lesión (GTL) en 56 pacientes de nuestra serie. Como era de esperar, el VMT y la GTL
elevados se correlacionaron con la enfermedad voluminosa, la presencia de síntomas
B, niveles séricos elevados de LDH, β2-microglobulina, estadio avanzado e IPI de alto
riesgo (P < 0.05 en todos los casos), además de presentar una menor tasa de
respuesta al tratamiento (VMT, 97% frente a 41%, p <0.001; GTL, 93% frente a 39%,
P < 0.001). Además, la concentración de ctDNA se correlacionó significativamente con
el VMT (R= 0.57, P <0.001) y GTL (R= 0.45; P <0.001), confirmando que las
mediciones de ctDNA están relacionadas con la carga tumoral del linfoma.
En el segundo trabajo se incluyeron 20 pacientes diagnosticados de LPM en dos
centros españoles entre 2015 y 2020. El perfil mutacional se pudo evaluar en ctDNA
en18/20 casos (M/H 11/7; mediana de edad 30 años). La sensibilidad del ctDNA para
detectar las mutaciones presentes en las muestras pareadas de FFPE fue del 69%
(95% IC: 60-78%).
El perfil mutacional obtenido de las muestras de plasma fue altamente concordante el descrito en la literatura. Además, observamos una concordancia del 75% entre
los microarrays de DNA y el low-pass WGS para detectar ganancias/pérdidas
cromosómicas, con una concordancia de ambas técnicas notablemente mayor para las
alteraciones clonales (18/20, 90%). No se observaron asociaciones significativas entre
la cantidad de ctDNA y la carga tumoral o el pronóstico de los pacientes.
Como conclusión de ambos trabajos, el ctDNA es una fuente alternativa para estimar
la carga tumoral y determinar el perfil mutacional y la clasificación genética del tumor,
con implicaciones pronósticas y pueden contribuir a un futuro tratamiento
personalizado.
El linfoma testicular de células B grandes (TLBCL) es un linfoma agresivo y poco
frecuente que se presenta en un sitio inmunoprivilegiado, recientemente reconocido
como una entidad distinta del DLBCL.
El objetivo del tercer trabajo fue la caracterización genética de TLBCL, así como la
posterior comparación con dos series previamente publicadas, una de LDCGB nodal y
otra de linfoma difuso de células de células grande B primario del sistema nervioso
central (PCNSL).
Se incluyeron 61 pacientes diagnosticados de TLBCL en seis centros españoles entre
2002 y 2021. La determinación de la célula de origen se evaluó mediante
inmunohistoquímica (algoritmo de Hans) y/o arrays de expresión (Lymph2Cx). Para
caracterizar las alteraciones genéticas del TLBCL, realizamos NGS utilizando un panel
diseñado de 115 genes, arrays de expresión para determinar las alteraciones del
número de copias y estudios de FISH (BCL2, BCL6 y MYC).
El 30% de los pacientes presentaban enfermedad diseminada (estadio IV) al
diagnóstico, incluidos 6 casos con afectación del SNC. El 83% de los casos presentó un
fenotipo no GCB por el algoritmo de Hans y el 71% correspondieron al subtipo ABC por
Lymph2Cx. Se observó una alta prevalencia de pérdida de expresión de HLA clase I
(91%) y HLA clase II (62%). Se detectaron reordenamientos de BCL6 en el 36%
(17/47) de los casos, sin reordenamientos concomitantes de BCL2 y MYC. Integrando
los resultados de las mutaciones y CNA los genes/regiones alteradas en >50% de los
casos fueron PRDM1, CDKN2A/B, TNFAIP3, SGK1, ARID1B, MYD88L265P, SPIB, PIM1 y
CD79B. Se detectaron alteraciones concomitantes en MYD88L265P, CD79B y PIM1 en
12 (29%) casos. Utilizando la herramienta LymphGen, el 71% (30/42) de los casos se
pudo clasificar en un subgrupo molecular, siendo MCD el grupo más frecuente (66%,
20/30).
Comparamos los pacientes con enfermedad localizada frente a los pacientes con
enfermedad sistémica (estadio IV). No se observaron diferencias en el subtipo de
COO, los subgrupos LymphGen o los reordenamientos MYC, BCL2 y BCL6. Los
pacientes con enfermedad localizada o diseminada mostraron una complejidad
genómica similar según la cantidad de CNA y la cantidad de genes mutados.
En comparación con el LDCGB nodal, los pacientes con TLBCL, tanto localizado como
diseminado, presentaron menos complejidad en el número de CNA (P= 0.01 y P <
0.04, respectivamente) pero mostraron una mayor cantidad de mutaciones (P= 0.01 y
P < 0.001, respectivamente). El TLBCL presentó con mayor frecuencia ganancias de
18q21.32-q23 (BCL2) y deleciones 6q y 9p21.3 (CDKN2A/B). Las mutaciones de PIM1,
MYD88L265P, CD79B, TBL1XR1, MEF2B, CIITA, EP300 y ETV6 se encontraron
enriquecidos en el TLBCL, mientras que las mutaciones de BCL10 en el LDCGB nodal.
No se hallaron diferencias genéticas entre TLBCL y PCNSL.
En conclusión, el TLBCL tiene un perfil genético distintivo similar al del PCNSL, lo que
respalda su reconocimiento como una entidad separada del LDCGB y proporciona
información decisiva para adaptar los enfoques terapéuticos.

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Tesis Doctorals - Facultat - Medicina i Ciències de la Salut

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Linfoma de células grandes B: Caracterización genética y utilidad en el diagnóstico y pronóstico de la biopsia líquida