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Si us plau utilitzeu sempre aquest identificador per citar o enllaçar aquest document: https://hdl.handle.net/2445/126664
Analysis of the molecular function of kazrin in endosomal trafficking
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Resum
[spa] La endocitosis es esencial para la célula eucariota. Permite a las células modificar rápidamente los complejos implicados en señalización y los transportadores de nutrientes e iones expuestos en la superficie celular, y es además esencial para mantener la homeostasis de proteínas de membrana y de lípidos y para distribuir el material intracelular. Por tanto, el tráfico endocítico puede regular la capacidad de la célula para detectar cambios en su microambiente y reaccionar ante ellos. Esta Tesis se centra en el estudio de la kazrina C, una proteína humana originalmente identificada en un cribado genético destinado a aislar cDNAs cuya sobreexpresión inhibía la endocitosis dependiente de clatrina (EMC), una de las vías de internalización endocítica mejor caracterizadas. Experimentos preliminares demostraron que la kazrina C era capaz de interaccionar con la maquinaria endocítica asociada a clatrina y que la depleción de la kazrina aceleraba la EMC y el reciclaje de la transferrina (Tfn), impidiendo sin embargo su transporte a los endosomas de reciclaje localizados perinuclearmente. Por otro lado experimentos basados en la immunofluorescencia indicaron que la kazrina C se localizaba en los endosomas tempranos donde se clasifica el material para su reciclado o degradación (Endosomas de clasificación), junto con la GTPasa rab4, la subunidad γ-adaptina del adaptador de clatrina AP-1 y EHD3. El trabajo aquí presentado confirma los efectos de la depleción de la kazrina sobre el tráfico de de la Tfn, utilizando una aproximación diferente para minimizar su expresión celular y ratifica mediante fraccionamiento subcelular el reclutamiento de la kazrina en endosomas tempranos. En consistencia con estas observaciones, demostramos también que en células transfectadas de manera transitoria, GFP-kazrina forma microdominios sobre endosomas marcados con YFP-rab4 en células vivas. Además, este trabajo aporta evidencias sólidas que demuestran una interacción directa de la Kazrina C con el dominio N-terminal de la clatrina y con su adaptador AP-1, que junto con Rab4b, y al igual que la kazrina, son necesarios para el transporte entre los endosomas de clasificación y los de reciclaje. Finalmente demostramos en este trabajo que la kazrina colocaliza con la actina endosomal y que interacciona directamente con el complejo Arp2/3 y su activador endosomal WASH y que tanto la depleción como la sobreexpresión de kazrina aumentan considerablemente la cantidad de actina polimerizada sobre estos orgánulos. Los datos son coherentes con un modelo según el cual la kazrina actuaría como un inhibidor citosólico de WASH, que sin embargo, una vez activado en las membranas endosomales podría inducir la polimerización de actina dependiente de WASH y del complejo Arp2/3 sobre dominios enriquecidos en clatrina. Tomados en su conjunto, nuestros resultados sugieren un papel de la kazrina en la encrucijada de reciclaje en los endosomas de clasificación, favoreciendo el transporte hacia los endosomas perinucleares de reciclaje e inhibiendo la via corta de reciclaje desde los endosomas de clasificación a la membrana plasmática. A nivel molecular, los datos sugieren que la kazrina podría controlar el balance de la polimerización de actina inducida por WASH, inhibiendo la misma sobre los microdominios ricos en retrómero, implicados en la vía corta de reciclaje a membrana plasmática, y promoviéndola en subdominios asociados a clatrina, implicados en el transporte a los endosomas perinucleares.
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BAUMANN, Adrian. Analysis of the molecular function of kazrin in endosomal trafficking. [consulta: 14 de desembre de 2025]. [Disponible a: https://hdl.handle.net/2445/126664]