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Si us plau utilitzeu sempre aquest identificador per citar o enllaçar aquest document: https://hdl.handle.net/2445/215978
Optimización del diagnóstico parasitológico de la leishmaniosis tegumentaria y caracterización de especie/s de Leishmania causantes del cuadro clínico en Cochabamba (Bolivia)
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[spa] En Bolivia, la leishmaniosis tegumentaria (LT) abarca siete de los nueve departamentos, siendo uno de los países que presenta un mayor número de casos de leishmaniosis mucosa (LM) o leishmaniosis mucocutánea (LMC). Debido a que existen enfermedades tropicales de otra etiología, que presentan una clínica similar, y a la toxicidad, elevado coste y escasa disponibilidad de los fármacos utilizados en el tratamiento, es necesario la confirmación de la enfermedad por técnicas de laboratorio. El diagnóstico de la leishmaniosis, se realiza por examen parasitológico directo (EPD) y cultivo, siendo el primero el más utilizados en laboratorios de baja complejidad, mientras que el cultivo se realiza en laboratorios de referencia. La caracterización de especies de Leishmania en el país se realiza en forma esporádica y solo con fines epidemiológicos o de investigación y la técnica utilizada es la PCR-RFLP. Dicha caracterización permitiría realizar el pronóstico de la enfermedad, mejorar su seguimiento y actualizar la distribución epidemiológica de las cepas que circulan en Bolivia. El objetivo general del presente trabajo es optimizar el diagnóstico parasitológico de la LT y caracterizar la/s especie/s de Leishmania causante/s del cuadro clínico en pacientes que asisten al Laboratorio de Parasitología de la Facultad de Medicina de la UMSS en Cochabamba, Bolivia. La caracterización se ha realizado mediante secuenciación del fragmento de 1245 pb del gen hsp70 y el MALDI-TOF MS, analizándose 55 cepas aisladas de 44 pacientes. Se identificaron 44 cepas del complejo L. braziliensis, dos cepas de L. lainsoni, una cepa de L. guyanensis y ocho cepas del complejo L. mexicana. La caracterización por secuanciación del complejo L. braziliensis reveló la presencia de L. braziliensis s. str., L. peruviana, una tercera posible especie, L. braziliensis outlier, y dos posibles híbridos de L. braziliensis/L. peruviana. MALDI-TOF, ha caracterizado de forma correcta todas las cepas de Leishmania a nivel de género, subgénero y complejo y el 81,8% a nivel de especie. Las cepas mal identificadas correspondieron a una cepa de L. peruviana, identificada como L. braziliensis s.str., dos híbridos L. braziliensis/L. peruviana, identificadas como L. braziliensis, dos L. mexicana, identificadas como L. amazonensis, y cinco híbridos de L. mexicana/L. amazonensis identificadas como L. amazonensis (2) y L. garnhami (3). Tan sólo una de las cepas del complejo L. mexicana fue correctamente identificada como L. amazonensis. Si se eliminan los híbridos, se incrementa el rendimiento del MALDI-TOF al 93,5%, por lo que, debido a su rapidez en la obtención de resultados, su simplicidad, el menor coste para la identificación de aislamientos de Leishmania, una vez obtenido el cultivo, y su facilidad de integrarse a un laboratorio clínico, podría constituirse como una estrategia de caracterización de especies de Leishmania en países endémicos donde aún no se tienen implementada la caracterización molecular. El complejo L. braziliensis ha presentado una gran diversidad genética por secuenciación, caracterizándose nueve genotipos diferentes de L. braziliensis outlier en 16 cepas analizadas en relación a L. braziliensis (6 genotipos en 24 cepas) y L. peruviana (1 genotipo en 1 cepa), característica que la posiciona a mayor distancia genética de L. braziliensis y L. peruviana. Es la primera vez que se aisla L. peruviana en Bolivia, en un paciente con LM y con falla terapéutica (FT). También se ha aislado L. braziliensis s. str. de LM en ocho pacientes, dos de éstos con FT, y L. braziliensis outlier de un paciente, ninguno con FT. La evaluación de las técnicas parasitológicas (EPD, cultivo en TSTB, minicultivo y microcultivo en medio Schneider) utilizando dos tipos de muestras (aspirado: 121 y raspado: 121), ha permitido demostrar que el raspado de los bordes de la lesión es más sensible (78%) que el aspirado (71%) para el diagnóstico de LT, independientemente de la técnica utilizada. El porcentaje de positividad en los cultivos, aumenta con el tiempo de cultivo, independientemente del método utilizad hasta el día 28, lo que sugiere que los cultivos deben mantenerse durante este tiempo. A pesar de observarse contaminación bacteriana, por levaduras y hongos filamentosos en un 37% de los cultivos, se observó crecimiento de las leishmanias en un 17% de los medios contaminados. Si bien el EPD puede seguir utilizándose en el diagnóstico de la LT dada la simplicidad en su ejecución, la seguridad para el personal de laboratorio y el menor traumatismo para el paciente, se recomienda la implementación del cultivo en TSTBS en el diagnóstico de la LT por su sensibilidad (98%), buena correlación con el estándar de diagnóstico (k-Cohen 0,88) y coeficiente de fiabilidad satisfactorio (α-Cronbach ≥0,91), siendo necesario capacitar al personal de los laboratorios de segundo y tercer nivel en Bolivia para su implementación.
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TORRICO DE SOLANO, Mary cruz. Optimización del diagnóstico parasitológico de la leishmaniosis tegumentaria y caracterización de especie/s de Leishmania causantes del cuadro clínico en Cochabamba (Bolivia). [consulta: 12 de desembre de 2025]. [Disponible a: https://hdl.handle.net/2445/215978]