Peptide-based approaches for the race against resistant bacteria

Abstract

[eng] Antimicrobial resistance to almost all available antibiotics is on the top ten list of global public health challenges of the World Health Organization. Each year, the deaths due to AMR infections achieve the alarming numbers of 35000 in the European Economic Area (EEA) and 700000 worldwide. This problem is due to the high capacity of bacteria to multiply and mutate quickly, caused mainly by the indiscriminate use of broad-spectrum antibiotics or the excessive use of antibiotics in the veterinary and food industries. The development of new antibiotics with novel mechanisms of action faces significant challenges, both scientifically and economically. As a result, the number of antibiotics approved by the Food and Drug Administration or the European Medicines Agency has drastically decreased in recent years. This thesis presents the design, synthesis, characterization and evaluation of the in vitro activity of 18 analogues of polymyxin B and 9 analogues of murepavadin, two cyclic antimicrobial peptides. The analogues incorporate a disulfide bond in the macrocycle, aimed at maintaining the in vitro activity against bacteria, while facilitating peptide proteolysis compared to an amide bond, potentially reducing renal toxicity. The analogues have been synthesized by solid-phase peptide synthesis (SPPS) following an Fmoc/tBu protection scheme. In addition, the mode of action of two polymyxin analogues has been studied using model membranes and biophysical techniques. Finally, polymyxin B and murepavadin have also been combined with cyclodextrins, and the formation of inclusion complexes has been studied by ITC, DSC, TGA, MS, UV-Vis and NMR techniques.

[cat] La resistència bacteriana a gairebé tots els antibiòtics disponibles es troba a la llista de prioritats mundials de salut pública de l’Organització Mundial de la Salut. Cada any, les morts associades a la resistència antimicrobiana assoleixen l’alarmant nombre de 35.000 a l’Espai Econòmic Europeu i 700.000 en tot el món. Aquest problema és degut a l’alta capacitat dels bacteris per multiplicar-se i mutar ràpidament, causada principalment per l’ús indiscriminat d’antibiòtics d’ampli espectre o l’ús excessiu d’antibiòtics en la indústria veterinària i alimentària. El desenvolupament de nous antibiòtics amb nous mecanismes d'acció s'enfronta a importants reptes, tant científics com econòmics. Com a resultat, el nombre d'antibiòtics aprovats per la Food and Drug Administration o la European Medicines Agency ha disminuït dràsticament en els últims anys. Aquesta tesi presenta el disseny, síntesi, caracterització i avaluació de l’activitat in vitro de 18 anàlegs de polimixina B i 9 anàlegs de murepavadina, dos pèptids cíclics antimicrobians. Els anàlegs incorporen un pont disulfur en el macrocicle, modificació que permetria mantenir l’activitat in vitro contra els bacteris, i alhora facilitaria la proteòlisi del pèptid en comparació a un enllaç amida, aconseguint una potencial disminució de la toxicitat renal. Els anàlegs s’han sintetitzat per síntesi en fase sòlida de pèptids (SPPS) seguint una estratègia de protecció Fmoc/tBu. A més, s’ha estudiat el mode d’acció de dos dels anàlegs de polimixina utilitzant models de membrana i tècniques biofísiques. Per últim, també s’ha combinat la polimixina B i la murepavadina amb ciclodextrines, i s’ha estudiat la formació de complexos d’inclusió per ITC, DSC, TGA, MS, UV-Vis i tècniques de RMN.