iPSCs, CRISPR/Cas9 y protocolos de diferenciación basados en factores de transcripción para generar nuevos modelos neuronales y astrocíticos del síndrome de Sanfilippo

Abstract

[spa] El objetivo general de esta tesis doctoral ha sido la generación de nuevos modelos celulares para el síndrome de Sanfilippo y su utilización para ensayar una aproximación terapéutica para esta enfermedad basada en el uso de siRNAs como terapia de reducción de sustrato. Los objetivos concretos han sido: 1) Generación de modelos celulares • Obtención y caracterización de líneas isogénicas con mutaciones en el gen HGSNAT derivadas de células madre pluripotentes inducidas de donantes sanos, mediante la tecnología de edición génica CRISPR/Cas9. • Diferenciación de las células madre pluripotentes inducidas con mutaciones en el gen HGNSAT a neuronas y astrocitos, utilizando un protocolo optimizado. • Obtención y caracterización de líneas isogénicas con mutaciones en el gen NAGLU derivadas de células madre pluripotentes inducidas de donantes sanos, mediante la tecnología de edición génica CRISPR/Cas9. 2) Aproximación terapéutica basada en siRNAs • Evaluación del efecto de diferentes siRNAs contra los genes EXTL2 y EXTL3, como terapia de reducción de sustrato, en fibroblastos de pacientes de Sanfilippo C. • Evaluación del efecto terapéutico de siRNAs contra el gen EXTL2, como terapia de reducción de sustrato, en neuronas derivadas de células madre pluripotentes inducidas con mutaciones en HGSNAT.