Tesis Doctorals - Departament - Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició

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Efectes de les condicions d’il·luminació en el ritme d’activitat motora de la rata
(Universitat de Barcelona, 1993-12-22) Vilaplana i Hortensi, Jordi; Díez Noguera, Antoni; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[cat] Aquest treball és un estudi de les característiques i propietats del Sistema Circadiari de la rata. El treball consta de 5 experiments diferents, realitzats tots ells amb una filosofia comú: es sotmeten els animals a diferents patrons d'il·luminació i a traves del seu ritme d'activitat motora s'infereix sobre les característiques que ha de tenir el sistema circadiari; s'entén que entre la senyal d'entrada (il·luminació) i la de sortida (activitat motora) hi ha l'acció del sistema circadiari de l'animal. Les conclusions a les que arriba l'autor un cop realitzats els 5 experiments són les següents: * El sistema que regula el ritme d'activitat motora de la rata és un sistema multioscil·lador. * Les rates poden sincronitzar a cicles simètrics de llum foscor de períodes compresos entre 22 i 28 hores. * Quan augmenta T augmenta la relació alfa/rho. * El tau en foscor constant depèn del període del cicle de llum foscor al qual ha estat sotmès prèviament l'animal. Aquesta relació segueix una funció polinòmica d'ordre 3, amb el punt d'inflexió en T pròxim a tau. * El patró diari d'activitat motora depèn del període del cicle extern, variant de forma gradual si T varia de forma gradual. * El patró diari d'activitat motora depèn de la intensitat de la llum, variant de forma gradual si la intensitat varia de forma gradual. * La pinealectomia no afecta el desenvolupament del ritme circadiari d'activitat motora, ni el seu tau ni el seu patró. * El patró d'activitat motora de les femelles és més estable que el dels mascles.
Clonaje, secuenciación y localización intracelular de la isoenzima BB de la fosfoglicerato mutasa de rata
(Universitat de Barcelona, 1991-01-01) Ureña Bares, Jesús Mariano; Climent i Romeo, Ferran; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[spa] El trabajo realizado ha consistido en el clonaje y la secuenciación del CDNA de la forma B de la fosfoglicerato mutasa de rata (PGM) por una parte y en el estudio de la localización intracelular de las isoenzimas de la PGM en distintos tejidos de rata por otro. Para llevar a cabo el clonaje, ha sido purificada a homogeneidad la proteína a partir de cerebro de rata, utilizando técnicas cromatográficas y obtenida pura a homogeneidad. Se han preparado los anticuerpos policlonales correspondientes en conejo. Estos anticuerpos muestran total especificidad, reconociendo una única banda por Western-Blot que corresponde al peso molecular de la subunidad de la enzima. Además, dan reacción cruzada con la otra isoenzima la forma M muscular. Los anticuerpos no se han empleado para el clonaje, pero si para los experimentos de localización intracelular. El clonaje se ha realizado utilizando como sonda el CDNA de la forma M previamente aislado por nuestro grupo. El CDNA consta de 1754 pares de bases, con una zona codificante de 762 bases que codifica para una proteína de 253 aminoácidos 96% homologa con la forma correspondiente humana. La homología a nivel de zona codificante es del 90%. EL CDNA tiene una zona no codificante 3' de 894 pares de bases que muestra una conservación con la forma humana del 64%. A nivel de Northern-Blot, este CDNA únicamente reconoce una banda del mismo peso molecular que el CDNA. Los estudios de localización intracelular se han realizado mediante experimentos de inmunocitoquímica y aislamiento de núcleos puros de distintos órganos. La inmunocitoquímica revela marcaje nuclear y citosólico en todos los órganos analizados: cerebro, hígado, corazón y musculo esquelético. Al aislar núcleos de todos estos órganos, se ha observado presencia de actividad enzimática y reacción antígeno-anticuerpo de la fosfoglicerato mutasa, confirmando los resultados de inmunocitoquímica.
Aminas biógenas y otros parámetros relacionados con la alteración bacteriana del pescado: estudio de su evolución y significación durante la elaboración de derivados
(Universitat de Barcelona, 1993-01-01) Veciana Nogués, María Teresa; Vidal Carou, Ma. Carmen; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[spa] Las aminas biógenas son unos compuestos químicos cuyo origen es la descarboxilación de aminoácidos, por lo que pueden actuar indirectamente como indicadores de la presencia de los mismos. Se plantea como objetivo global el estudio del posible empleo de las aminas biógenas como indicadores químicos del estado higiénico-sanitario de la materia prima empleada para la elaboración de conservas de atún y semiconservas de anchoa. Para ello, se ponen a punto métodos analíticos para la determinación de aminas biógenas y para la determinación de ATP y derivados y dimetilamina y trimetilamina, que son otros compuestos químicos empleados para evaluar la perdida de frescura del pescado. Se comprueba la relación entre las aminas biógenas y el deterioro del atún y del boquerón por parte de microorganismos. Se comprueba también la no formación de aminas biógenas durante la elaboración de conservas de atún y de semiconservas de anchoa, y finalmente se pone en evidencia la formación de estos compuestos durante el periodo de validez comercial de las semiconservas de anchoa cuando estas se almacenan en condiciones inadecuadas (no refrigeradas). Globalmente se concluye que las aminas biógenas histamina, tiramina, putrescina, cadaverina, B-feniletilamina y triptamina, pueden ser útiles como indicadores del estado higiénico del pescado empleado como materia prima en los dos productos derivados estudiados, aunque en el caso de las semiconservas de anchoa debe de tratarse de productos recién elaborados y mantenidos en adecuadas condiciones de refrigeración.
Metabolisme i funció de la fructosa 2 6-bisfosfat en el teixit cerebral
(1992-01-01) Ventura Pujol, Francesc; Bartrons Bach, Ramon
[cat] El cervell representa aproximadament el 3% del pes corporal d'un adult normal i consumeix el 20% del total de glucosa i oxigen que utilitza l'organisme. La glucosa és el substrat energètic més important, aportant un 90% de l'energia total consumida per aquest òrgan (Drewes & Gilboe, 1973; Mcllwain & Bachelard, 1985; Siebert et al, 1986; Sokoloff, 1989). Les reserves de carbohidrats en el cervell són relativament baixes i sols poden compensar durant uns minuts les seves necessitats energètiques. El cervell és, per aquest motiu, totalment depenent del subministrament continu de glucosa des del torrent sanguini. En condicions normals, la capacitat de transport de glucosa a través de la barrera hemato-encefàlica, en el sentit de circulació sanguínia cap al cervell, és 3 vegades superior a la velocitat de fosforil·lació de la glucosa per l’hexoquinasa cerebral (Lund- Andersen, 1979). Si l'entrada de glucosa en les cèl·lules del teixit cerebral no és un pas limitant en el metabolisme d'aquest teixit, el control de l'oxidació deis carbohidrats s’haurà d'efectuar en les reaccions enzimàtiques considerades reguladores de la glucòlisi (Lowry & Passonneau, 1964; Drewes & Gilboe, 1973; Kintner et al., 1980). El control de la glucòlisi cerebral és exercit fonamentalment a través de la regulació de l’hexoquinasa, la 6-fosfofructo-l-quinasa i la piruvat quinasa, en adició al control del transport de glucosa que, en algunes condicions com l'anòxia i la hipoglucèmia, pot ser un factor limitant (Lund-Andersen, 1979). Diferents autors (Lowry and Passonneau, 1964; Ruderman et al., 1974; Gorell et ai,.1977; Kintner et al., 1980; Ogushi et al.,1990) han postulat que el punt limitant i regulador de la glucòlisi cerebral és a nivell de la PFK-1. Aquest enzim és modulat per nombrosos efectors i representa un exemple paradigmàtic d'enzim multimodulat (Sols, 1981). La fructosa 2,6-bisfosfat és l'activador al·lostèric més potent de la 6-fosfofructo-1-quinasa i inhibidor de la fructosa 1,6-bisfosfatasa, realitzant un paper important en la regulació de la glucòlisi/gluconeogènesi hepàtica (Hue & Bartrons, 1985). La seva síntesi i degradació estan catalitzades per la 6-fosfofructo-2-quinasa i la fructosa 2,6-bisfosfatasa respectivament (Van Schaftingen, 1987; Hue & Rider, 1987; Pilkis & El-Maghrabi, 1988). Ambdues activitats estan situades a diferents dominis de la mateixa proteïna. Aquest enzim bifuncional integra senyals metabòlics i hormonals per medi de modificadors al·lostèrics, processos de fosforil·lació/defosforil·lació i diversos factors de transcripció que regulen la seva expressió (Van Schaftingen, 1987; Hue & Rider, 1987; Pilkis & El-Maghrabi, 1988; Colosia et al., 1988; Marker et al., 1988; Wall et al., 1989; Pilkis, 1991; Cifuentes etal., 1991). El metabolisme de la fructosa 2,6-bisfosfat.en el cervell i el seu possible paper regulador sobre la glucòlisi cerebral no havien estat estudiats fins el moment. Dades prèvies indicaven que la fructosa 2,6-bisfosfat era present en cervell de rata (Kuwajima & Uyeda, 1982) i en astròcits i neurones en cultiu (Pauwels & Trouet, 1984). A més, hi havia dades que demostraven que, d'una forma semblant a d'altres teixits, era un potent activador de la 6-fosfofructo-l-quinasa cerebral (Foe & Kemp, 1985; Vora et al., 1985; Dunaway et al., 1988). En base a aquestes dades ens vam plantejar un estudi més exhaustiu del possible paper regulador de la fructosa 2,6-bisfosfat sobre el metabolisme energètic cerebral i, al mateix temps, de la pròpia regulació del metabolisme de la fructosa 2,6-bisfosfat en el teixit cerebral. Amb aquesta finalitat ens vam proposar els següents objectius: 1.-Estudi del paper de la fructosa 2,6-bisfosfat en el control del flux glucolític cerebral. 1.1 - Paper de la fructosa 2,6-bisfosfat en situacions d'interrupció aguda de Taport de substrats energètícs al cervell. 1.2 - Paper de la fructosa 2,6-bisfosfat en situacions d'aportació de substrats energètícs altematius al cervell. 1.3 - Estudi del metabolisme de la fructosa 2,6-bisfosfat durant el desenvolupament. 2.-Regulació del metabolisme de la fructosa 2,6-bisfosfat. 2.1 - Purificació i caracterització de la 6-fosfofructo-2-quinasa/fructosa 2,6-bisfosfatasa cerebral. 2.2 - Clonatge i expressió de la 6-fosfofructo-2-quinasa/fructosa 2,6-bisfosfatasa cerebral.
Regulació del promotor del gen Dihidrofolat Reductasa en la proliferació cel·lular: relació amb la resistència generada pel metotrexat
(Universitat de Barcelona, 1995-01-01) Noé Mata, Verónica; Ciudad i Gómez, Carlos Julián; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[spa] Hemos determinado que la activación de la proteína Quinasa C y la movilización del calcio intracelular son vías bioquímicas involucradas en el desarrollo de la resistencia al metotrexato. Los inhibidores de la proteína Quinasa C son capaces de contrarrestar el incremento de la resistencia generado por el tratamiento con el éster de forbol TPA, y entre estos inhibidores, la Calfostina C también es efectiva en la reducción de la resistencia basal al metotrexato. Este resultado podría tener una aplicación práctica en la terapia con metotrexato ya que la administración conjunta de un inhibidor de la proteína Quinasa C podría actuar como modulador de la resistencia al tratamiento quimioterápico. Por otro lado, hemos profundizado en el estudio del promotor del gen dihidrofolato reductasa tanto en condiciones basales como en el proceso de proliferación y hemos determinado la gran importancia del factor de transcripción SP1 en la activación de la transcripción de este gen. Además, hemos establecido la existencia de un complejo transcripcional, en todas las fases del proceso de proliferación, entre la proteína supresora de tumores retinoblastoma y el factor de transcripción SP1 cuando este último se une al promotor del gen Dihidrofolato Reductasa. Finalmente, hemos establecido una relación a nivel molecular entre la unión del factor de transcripción SP1 al promotor del gen Dihidrofolato Reductasa y el desarrollo de la resistencia al metotrexato.
Características organolépticas de los vinos base destinados a la elaboración del cava en función de tratamientos tecnológicos prefermentativos
(Universitat de Barcelona, 1993-01-01) López Tamames, Elvira; Torre Boronat, Carmen de la; Fernández López, Concepción; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[spa] Se han realizado un total de 105 determinaciones químicas y sensoriales, relacionadas principalmente con el color, el gusto y el aroma de mostos y vinos blancos del Penedés y destinados a la elaboración de vino espumoso (Cava). Las muestras analizadas corresponden a un ensayo a escala piloto (vendimia de 1988), a cuatro vinificaciones realizadas a escala industrial (vendimias de 1990 y 1991) y a 28 vinos blancos industriales (vendimias de 1990 y 1991). Estas muestras pretenden poner de manifiesto la posible influencia de distintas tecnologias prefermentativas sobre las características sensoriales resultantes. Las tecnologías estudiadas han sido: el tipo de desfangado (estático y dinámico por filtración), la clarificación, el prensado y el conjunto de prácticas tecnológicas propias de las bodegas elaboradoras. Se ha observado que el desfangado por filtración al vacio produce mayores pérdidas en gran parte de los componentes del mosto, con respecto al desfangado estático por decantación. Estas pérdidas repercuten en las características de los vinos, siendo igualmente drásticas para aquellos parámetros considerados "a priori" positivos (aroma afrutado y floral), como para los negativos (aromas y gustos herbáceos). Asimismo, mediante análisis estadístico multivariante, se ha puesto de manifiesto la gran influencia que tienen el año de vendimia, la variedad de uva y la tecnología asociada a las bodegas elaboradoras (desfangado, prensado, levadura, etc.) sobre la calidad organoléptica de los vinos destinados a la obtención de cava.
Caracterización de las HMG-CoA reductasa quinasas de citosol y microsomas de hígado de rata: estudio cinético de su activación por nucleótidos
(Universitat de Barcelona, 1986-01-01) Ferrer i Prats, Albert; García Hegardt, Fausto; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[spa] La enzima 3-hidroxi-3-metilglutaril coenzima A reductasa se considera la principal reguladora de la vía metabólica de síntesis del colesterol. Como se expone más adelante, se trata de una enzima que está sometida a múltiples mecanismos diferentes de regulación de su actividad, que pueden agruparse en dos grandes tipos, en función de la rapidez con que se manifiestan sus efectos sobre la actividad enzimática. Así pues, la HMG-CoA reductasa se halla controlada a través de mecanismos que afectan a la cantidad de enzima presente en las células y a través de modificaciones que alteran el estado de actividad de la enzima ya existente. De entre estos últimos, el mecanismo regulador más importante es el que se ejerce gracias a la modificación covalente de la enzima, por fosforilación eversible. En el Departamento de Bioquímica de la Facultad de Farmacia se ha desarrollado una línea de investigación dedicada al estudio del mecanismo de interconversión de la HMG-CoA reductasa entre formas de distinta actividad, a través de la fosforilación y desfosforilación de la enzima, mediada respectivamente, por HMG-CoA reductasa quinasas y HMG-CoA reductasa fosfatasas. La mayoría de estudios acerca de la fosforilación de la HMG-CoA reductasa, realizados anteriormente al inicio del presente trabajo, han sido desarrollados empleando preparaciones de HMG-CoA reductasa quinasa en el citosol, en los microsomas o en preparaciones escasamente purificadas. Por ello, el primer objetivo planteado fue la obtención de preparaciones de HMG-CoA reductasa quinasa suficientemente purificadas y activas, procedentes de las fracciones citosólica y microsomal del hígado de rata. Ello permitiría estudiar de una manera sistemática y reproducible, el fenómeno de la inactivación por fosforilación de la HMG-CoA reductasa. Dada la controversia existente acerca de la realidad y significación del proceso de fosforilación,nuestro objetivo inmediato fue la demostración de que nuestras preparaciones enzimáticas eran capaces de fosforilar significativamente a la reductasa, inactivándola simultáneamente, de manera reversible. Ello permitiría, además, estudiar la posible existencia de características diferenciales en la fosforilación por las dos proteína quinasas purificadas. Finalmente, y como objetivo de tipo más general, el análisis comparativo de los resultados derivados del estudio anterior con ambas HMG-CoA reductasa quinasas permite investigar la identidad de las dos reductasa quinasas y establecer si realmente se trata de la misma enzima o bien, por el contrario, son enzimas distintas.
Análisis, formación y evolución de aminas biógenas en cervezas
(Universitat de Barcelona, 1991-01-01) Izquierdo Pulido, Maria; Vidal Carou, Ma. Carmen; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[spa] Las aminas biógenas son microcomponentes de los alimentos cuya importancia toxicológica y tecnológica no esta definitivamente establecida. En este trabajo se aportan nuevos datos que ayudan a conocer los contenidos de estas sustancias en cervezas consumidas en nuestro país y su significación. Igualmente, se estudian los factores que pueden influír en la formación y evolución de las aminas durante la elaboración de las cervezas. Las etapas desarrolladas han sido las siguientes: 1. Desarrollo y estudio de un metodo por cromatografía líquida de alta eficacia en fase reversa y derivatización post columna con orto ftalaldehido para la determinación de 10 aminas biógenas en cervezas y en sus materias primas. 2. Determinación de los contenidos de aminas biógenas en unas 200 cervezas diferentes. Se pueden considerar como aminas mayoritarias de las cervezas a la agmatina, tiramina y pustrescina y como minoritarias a la histamina, beta-feniletilamina, cadaverina, triptamina, espermina y espermidina. Respecto a la significación toxicológica y a la vista de los resultados parece adecuada la inclusión de las cervezas en la lista de alimentos a evitar por parte de pacientes bajo tratamiento con medicamentos IMAO (inhibidores del enzima monoamino-oxidasa). 3. Estudio del origen de las aminas biógenas en cervezas. La malta y el lúpulo aportan aminas biógenas a la cerveza, especialmente putrescina, agmatina, espermidina y espermina. Además, durante el malteado existe una evidente formación de aminas. A lo largo de fermentación de la cerveza, solo existe formación de tiramina, acompañada de una cierta formación de triptamina.
Formación de oxiesteroles en el huevo en polvo durante el proceso de atomización y el almacenamiento
(Universitat de Barcelona, 1994-02-01) Guardiola Ibarz, Francesc; Boatella Riera, Josep; Codony Salcedo, Rafael; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[spa] La oxidación del colesterol da lugar a la formación de oxiesteroles (OE), compuestos para los que se han descrito una serie de efectos biológicos (citotoxicidad, aterogénesis, mutagénesis, carcinogénesis, etc.). Asi, la determinación de estos compuestos en alimentos es un tema de creciente interés, tanto como posible parámetro de control, como para evaluar la ingesta de estos derivados a partir de los datos de consumo de alimentos. La revisión bibliográfica realizada sobre contenidos de OE en alimentos, sus mecanismos de formación, sus efectos biológicos y la metodologia aplicable para su determinación condujo al establecimiento de una serie de objetivos experimentales, tomando como modelo de estudio el huevo. Los objetivos propuestos fueron los siguientes: 1) Estudio de la composición lipídica (ácidos grasos y colesterol) del huevo fresco, como punto de referencia de los procesos de alteración oxidativa; 2) Discusión de la metodología analítica existente, estudio comparativo y elección de un método para la determinación de OE; 3) Establecimiento de contenidos de OE en huevos y ovoproductos; 4) Estudio de la formación de OE durante los procesos de obtención de huevo en polvo por atomización; 5) Estudio de la formación de OE durante el almacenamiento de huevo en polvo; 6) Estudio de las relaciones entre la formación de OE en huevo en polvo y ciertos parámetros de alteración (parámetros de oxidación lipídica y relacionados con la reacción de Maillard).
Regulación nutricional de enzimas clave en la glucolisis-gluconeogénesis: expresión del gen 6-PF 2-K/FRU 2,6-P(2)ASA en hígado de Sparus aurata
(Universitat de Barcelona, 1996-06-13) Metón Teijeiro, Isidoro; Vázquez Baanante, Ma. Isabel; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[spa] A través de estudios de ayuno y realimentación, y de tipo y cantidad de dieta suministrada, hemos comprobado cómo afecta el estado nutricional a enzimas clave implicadas en glucólisis-gluconeogénesis, vía de las pentosas fosfato y metabolismo de aminoácidos en hígado del pez teleósteo Sparus aurata. La investigacion se ha centrado en el control de la expresión génica de la enzima bifuncional 6-PF 2-K/FRU 2,6-P2ASA, responsable de la sintesis y degradación de FRU 2,6-P2, principal activador de la glucólisis e inhibidor de la gluconeogénesis. Flujo glucolítico, ruta de las pentosas, así como actividad quinasa, cantidad de proteína y niveles de mRNA de 6-PF 2-K/FRU 2,6-P2ASA, parámetros todos disminuídos por el ayuno, correlacionaron con la cantidad de dieta suministrada y con el nivel de carbohidratos aportado por la dieta. Esta enzima ha mostrado ser regulada a corto plazo fundamentalmente por alosterismo y/o modificación covalente, y a largo plazo por el nivel de proteína y mensajero. El análisis de los niveles de mRNA por Northern Blot se ha realizado con una sonda homóloga obtenida por RT-PCR, cuya secuencia es la primera descrita para el mensajero de 6-PF 2-K/FRU, 2,6-P2ASA en peces.
Adaptabilitat del múscul esquelètic a l'exercici de curta durada: metabolisme energètic
(Universitat de Barcelona, 1992-07-02) Cadefau Surroca, Joan Aureli; Cussó Fresquet, M. Roser; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[cat] 1) INTRODUCCIÓ: Una característica fonamental del múscul esquelètic és la gran diversitat que presenta. No hi ha cap múscul idèntic a un altre, músculs homòlegs de diferents espècies i fins i tot dins del mateix animal presenten diferències en la composició fibril.lar. Aquesta heterogeneïtat reflecteix l'alt grau d'especialització i a més, és la base de la seva plasticitat funcional.El múscul esquelètic té una gran capacitat d'adaptació. És d'esperar que músculs que estan predominantment involucrats en el manteniment de la posició corporal siguin diferents dels que intervenen en moviments espontanis. Així, músculs que podem dir que estan tot el dia en contracció (músculs posturals), reben molta quantitat d'estímuls i són músculs de contracció lenta que es caracteritzen per l'alta capacitat oxidativa i estan formats principalment per fibres de tipus I. (Per exemple el múscul "Soleus", en el conill).En canvi els músculs que s'utilitzen de forma espontània, només reben impulsos de tant en tant. Són músculs de contracció ràpida i es caracteritzen per la gran capacitat glucolítica, formats majoritàriament per fibres de tipus II (Per exemple el múscul "Tibialis anterior" en el conill).Les fibres musculars estan en un estat dinàmic, la qual cosa explica l'habilitat que tenen de respondre específicament, amb canvis en l'expressió fenotípica, a una demanda funcional diferent.Tant amb l'exercici com amb l'estimulació elèctrica es provoca un augment de l'activitat contràctil. Així, les característiques fenotípiques dels músculs que intervinguin a l'exercici o que siguin sotmesos a l'estimulaci6 elèctrica es modificaran com a resposta adaptativa a la nova demanda funcional.Tots els canvis que es donen en aquesta resposta adaptativa ho fan de forma seqüencial i ordenada, per tant és d'esperar que hi hagi algun tipus de senyal que els iniciï i que es produeixi a les primeres fases del procés adaptatiu. Aquesta hipòtesi ens ha portat a estudiar les modificacions de les concentracions musculars de diferents metabòlits durant períodes curts d'activitat contràctil, amb l'objectiu d'estudiar quins metabòlits podrien actuar com a senyal iniciador dels canvis que es donen en la transformació del múscul esquelètic i el comportament d'aquest durant l'exercici.2) MÈTODESPer poder assolir l'objectiu proposat es varen utilitzar diferents models experimentals. Una part d'aquests es realitzà amb conills ("Oricfolagus cuniculus"). El model consistí a sotmetre el múscul "Tibialis anterior" (TA) a una estimulació crònica a baixa freqüència (l0 Hz) durant un període aproximat de dos mesos.A tots els animals la pota contralateral va ser utilitzada com a control, implantant-hi els elèctrodes però sense estimular-la.Es van obtenir mostres als temps d'estimulaci6: 15 minuts, 1, 3, 12 i 24 hores; 2, 4, 10 i 50 dies. Per cada punt es van utilitzar entre 3 i 4 animals.Després de tenir ben caracteritzats els canvis metabòlics, durant el procés d'estimulació, ens centràrem en una altra situació experimental. Una de les potes posteriors es sotmetia a un període de 24 hores d'estimulació contínua a 10 Hz (pota entrenada), mentre que la contralateral (pota control) es mantenia en repòs. Quan els músculs estaven aïllats aplicàvem un estímul de 10 Hz a les dues potes i extrèiem el TA a diferents temps 0, 1, 3, 10 i 300 segons.Posteriorment ens vàrem plantejar una sèrie d'experiments en humans. Els voluntaris varen ser dividits en dos grups que es diferenciaven en la durada del període d'entrenament i en el tipus d'exercici a realitzar. L'entrenament en els dos grups consistí a efectuar un esforç a un 65% de la VO(2) màx durant dues hores, el període va ser de tres dies en un dels grups i de sis dies a l'altre.L'exercici després de tres dies d'entrenament es caracteritzava principalment pel fet que la intensitat de l'esforç es mantenia constant a un 65% de V02 màx. S'obtenien biòpsies al repòs, als 3 i 15 minuts i a la fatiga abans i després de l'entrenament.En canvi, l'exercici després de sis dies d'entrenament es caracteritzava pel fet que cada vint minuts s'incrementava la intensitat de l'esforç. L'augment va començar en un 60%, després va continuar a un 79% i finalment a un 90% de la VO(2) màx. S'obtenien biòpsies al repòs i cada vint minuts coincidint amb el canvi d'intensitat i a la fatiga.3) RESULTATS I CONCLUSIONSDurant el període de 50 dies d'estimulació s'observà un increment significatiu i transitori de Glucosa l ,6-P(2) i de Fructosa 2,6-P(2) a les 24h d'iniciar-se l'estimulació. Aquesta pujada podria suggerir una activació de la via glucolítica aeròbica a través de l'enzim fosfofructoquinasa, ja que ambdós metabòlits estan descrits com a uns dels més importants efectors al.lostèrics d'aquest enzim.Degut als resultats anteriors, ens plantejàrem estudiar quin efecte podria tenir l'exercici en unes condicions en què els dos sucres anteriorment esmentats estaven per sobre dels nivells normals. En el múscul estimulat 24 hores a 10 Hz, quan és sotmès a un exercici, es produeix un estalvi de glicogen degut a una major velocitat de resíntesi, l'activitat glicogen sintasa després del període d'estimulaci6 ha augmentat significativament, o a que s'utilitza un altre substrat energètic. L'augment de l'activitat hexoquinasa ens fa pensar que la glucosa podria ser aquest nou substrat. A més, l'acúmul de sucres bisfosforilats activa la PFK, mentre que la no aparició de lactat suggereix que la glucòlisi aeròbica està activada.L'efecte de l'entrenament en humans, ja sigui de tres o de sis dies, millora la resposta a l'esforç ja que tots els atletes han augmentat el temps de durada de l'exercici. Després de l'entrenament s'observa un menor acúmul de lactat intramuscular i sanguini i un estalvi de glicogen durant els dos tipus d'exercici. A més, les variacions dels metabòlits intermediaris durant l'exercici després de l'entrenament no s6n tan accentuades.Amb els resultats que hem obtingut podem concloure que l'exercici muscular de curta durada aplicat tant en forma d'estimulació elèctrica com d'entrenament, produeix una adaptación metabòlica que consisteix en un estalvi de creatinafosfat i de glicogen, i en una disminució de la producció de lactat. Aquesta situació podria ser compatible amb una adaptació a l'augment de la utilització de glucosa sanguínia i de la capacitat de la glucòlisi aeròbica. Les modificacions en les concentracions dels sucres bisfosforilats GJu 1,6-P(2) i Fru 2,6-P(2) durant les fases d'entrenament i/lo exercici jugarien un paper fonamental en el manteniment de la capacitat glucolítica.
Immunoteràpia de l'artritis adjuvant amb anticossos monoclonals antilimfocítics
(Universitat de Barcelona, 1995-12-22) Pelegrí i Gabaldà, Carme; Castell, Margarida; Franch i Masferrer, Àngels; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[cat] L'artritis reumatoide (AR) és una malaltia crònica localitzada principalment en les articulacions, on es produeix inflamació de la membrana sinovial, degeneració del cartílag i l'os, que finalment originen la seva deformació i incapacitació. A més a més, l'AR és una malaltia autoimmunitària, on es desenvolupen diferents tipus d'autoanticossos, com el factor reumatoide dirigit contra la propia IgG i anticossos contra el col.làgen articular. Avui encara es desconeix l'etiologia i la patogènesi del procés artrític i per això resulta essencial disposar de models animals que presentin mecanismes patogènics semblants als de la malaltia humana per tal de dissenyar millors estratègies terapèutiques. L'artritis adjuvant (AA) és una patologia induïda en rata que es considera model d'AR i que cursa amb inflor, eritema, dolor i impotència funcional de les articulacions dels animals afectats. Avui s'accepta que aquesta patologia és mitjançada fonamentaJment per limfòcits T. En el present treball es va pretendre: identificar les poblacions cel.lulars presents en el teixit sinovial inflamat: esbrinar el possible paper dels limfòcits T gamma/delta, T CD4 i T CD8 en el desenvolupament i perpetuació de l'AA; i conèixer si la teràpia amb un anticòs monoclonal (AcMo) dirigit contra la molècula CD4 és capaç de modificar el curs de l'AA. Per assolir els objectius esmentats, és a dir, per delimitar quines subpoblacions de limfòcits T estan implicades en l'AA, es van realitzar diferents protocols d'immunoteràpia amb AcMo dirigits contra determinades molècules de superfície presents en els limfòcits T alfa/beta, T gamma/delta, T CD4 i T CD8. Yoshino i col.laboradors, al 1990, ja van demostrar la implicació dels limfòcits T alfa/beta en el desenvolupament i en la perpetuació de l'AA, i en el present estudi el mateix AcMo R73 dirigit contra el TCR-alfa/beta de rata ha estat utilitzat com a control positiu de tractament. Fins a l'actualitat no es coneixia el paper dels limfòcits T gamma/delta a l'AA a causa de que no existia un AcMo anti-TCR-gamma/delta de rata. En el present treball, i gràcies al recent descobriment per part del grup del Prof. Hünig de Würzburg de l'AcMo V65 s'ha pogut avaluar la implicació d'aquestes cèl.lules en aquest model experimental. D'altra banda, també s'han realitzat estudis d'immunoteràpia emprant un AcMo anti-CD4. el W3/25, que no havia estat utilitzat anteriorment en l'AA, i que per tant, no es coneixia el seu potencial terapèutic en aquest model experimental. A més a més, s'ha assajat la teràpia combinada anti-CD4 + anti-CD8, que tampoc no ha estat descrita fins a l'actualitat, i que ha permès determinar els efectes de la població CD8+ sobre els Iimfbcits T CD4+-. Totes aquestes teràpies anaven encaminades a inhibir el desenvolupament de l'AA. La inducció de l'AA en rates de la soca Wistar o Lewis es va realitzar mitjançant l'administració d'una suspensió de Mycobaeterium butyricum o de Mycobaeterium tuberculosis al 0,5% en vaselina liquida, per via intradèrmica a la base de la cua. Durant els primers dies després de la inducció no s'observa cap signe extern i a partir dels 10-12 dies es manifesta una.inflamació sistèmica que afecta a les extremitats posteriors i sovint també a les anteriors de l'animal. En els diferents experiments s'ha realitzat un seguiment de la inflamació dels animals mitjançant paràmetres clínics, com l'índex d'artritis, que comprèn la valoració clínica del grau d'eritema i d'edema de les quatre articulacions; i l'increment de volum articular de les extremitats posteriors, mesurat per pletismometria. Per a l'anàlisi de les poblacions cel·lulars presents en teixit sinovial s'ha utilitzat una tècnica immunohistoquímica. Com a substrat s'han utilitzat talls criostàtics de membrana sinovial i la identificació de determinats antígens de membrana s'ha realitzat utilitzant AcMo dirigits contra aquests antígens de superfície cel·lular. La reacció s'ha revelat amb el mètode peroxidasa-anti-peroxidasa. A partir de mostres de plasma dels animals artrítics. s'ha detenninat la concentració d'anticossos dirigits contra el micobacteri, la concentració dels AcMo administrats i de la resposta dirigida contra aquests, mitjançant tècniques d'ELISA. Per a determinar l'efecte a nivell cel.lular dels AcMo administrats s'ha utilitzat la citometria de flux. Aquesta tècnica permet la identificació de poblacions cel.lulars mitjançant la detecció d'antígens de la seva superfície, prèviament marcats amb anticossos conjugats a un fluorocrom. Un pas previ per a l'anàlisi citomètrica de les poblacions de sang perifèrica és l'aïllament dels limfòcits. Amb el fi de conèixer quin mètode és el més adequat per analitzar els limtècits de sang perifèrica dels animals dels estudis d'immunoteràpia, es van comparar els efectes de quatre mètodes d'aïllament de limfòcits sobre sang de rata: gradient de Ficoll-Isopaque, lisi amb clorur amònic, lisi amb reactiu de Becton & Dickinson i lisi mitjançant el sistema Coulter Q-prep. Els limfòcits es van marcar amb AcMo dirigits contra diferents subpoblacions limfocítiques. En considerar tots els marcatges realitzats no es van trobar diferències entre els mètodes, la qual cosa dona validesa als 4 mètodes per a sang de rata. Però l'anàlisi estadística que va considerar els resultats obtinguts per cada AcMo per separat va mostrar algunes diferències significatives. El gradient Ficoll-Isopaque, és el que va proporcionar uns percentatges més baixos de limfòcits CDS+, CD4+ i CD25+, suggerim una pèrdua selectiva d'alguns limfòcits T. Per altra banda, amb el clorur amònic, es van obtenir els percentatges més baixos de limfòcits B, i aquest fet es pot atribuir a que una part dels limfòcits B són sensibles a les condicions d'aquest mètode. En els dos mètodes comercials, els percentatges corresponents a la majoria de les poblacions estudiades van presentar valors intermitjos. En el nostre estudi, es va triar el clorur amònic com a mètode de lisi per els estudis d'immunoteràpia. Aquest mètode no afecta selectivament cap població de limfòcits T i, a més a més permet realitzar el marcatge sobre cèl.lules aïllades i presenta un baix cost. Per conèixer quins tipus cel.lulars estan involucrats a nivell de l'articulació inflamada en l'AA, es va realitzar l'estudi histològic de la membrana sinovial de genoll. La membrana sinovial està formada per teixit conjuntiu i revesteix tota la cavitat articular, a excepció dels cartílags. El teixit sinovial artrític augmenta de mida i en general incrementa unes tres vegades el seu pes. L'estudi histològic de la membrana sinovial mostra en el teixit control una capa íntima formada per 1 ó 2 fileres de sinoviòcits i una capa subíntima formada per teixit adipós amb alguns vasos sanguinis. Als 14 dies de la inducció, amb inflamació articular ja establerta, a nivell sinovial s'observa un augment en el nombre de fileres de cèl.lules de la capa íntima. També s'observen plegaments cap a la cavitat articular. Existeix un gran nombre de cèl.lules mononuclears i gran quantitat de fibres de col.làgen en la capa subíntima. L'estudi immunohistoquímic de la membrana sinovial es va realitzar amb el mètode peroxidasa-antiperoxidasa. En alguns teixits sinovials inflamats, es van identificar algunes cèl.lules CD5+ amb l'AcMo OX19. Aquestes cèl.lules CD5+ no van aparèixer en cap teixit control sa. El nombre de cèl.lules CD8+ de la capa subíntima va incrementar significativament del dia 14 al 28 postinducció respecte als teixits control. L'AcMo W3/25, que s'uneix a l'antigen CD4 de limfòcits T col.laboradors i de macròfags, ja detecta cèl.lules positives en tots els teixits sinovials control i el seu nombre augmenta en els teixits artrítics. A causa de les poques cèl.lules CD5+ trobades i de la morfologia i la tinció citoplasmàtica d'aquestes cèl.lules es poden considerar macròfags. L'AcMo OX6 que detecta la molècula lA present en diferents tipus cel.lulars marca un gran nombre de cè1.lules a nivell de l'enzima sinovial dels animals control, i en els animals artrítics aquest nombre és molt elevat. Com a primer estudi d'immunoteràpia i per tal d'analitzar la implicació dels limfòcits T gamma/detla en l'AA, van portar a terme diferents protocols terapèutics amb un AcMo dirigit contra el TCR-gamma/delta de rata, l'AcMo V65. Es van desenvolupar diferents protocols d'administració d'aquest anticòs: un tractament preventiu, realitzat a animals nounats des del moment del naixement i a dosis creixents durant 8 setmanes, és a dir durant tot el període previ a la inducció de l'AA; i 2 tractaments curatius. Un dels protocols va consistir en administrar els anticossos els dies 12, 15 i l8, és a dir, començant abans del màxim d'inflamació articular i l'altre protocol, en el qual es van assajar tres dosis diferents de l'anticòs, es va iniciar durant el màxim d'inflamació, és a dir el dia 15. En els dos tractaments curatius. es va realitzar un tractament paral.lel amb l'AcMo R73, dirigit contra el TCR-alfa/beta, com a control positiu del tractament. En tractar amb l'AcMo V65 només es van observar algunes cèl.lules gamma/delta amb una expressió normal del seu TCR a nivell de sang perifèrica, ganglis limfàtics poplitis i mesentèrics. El que apareix és una població de limfòcits amb una expressió antigènica disminuïda de les molècules de TCR gamma/delta i de CD3 en la seva superfície. Aquest fet indica que l'AcMo V65 va produir la down-regulation del receptor i també la comodulació de la molecula CD3. Ara bé, el percentatge d'aquesta subpoblació amb el TCR modulat era inferior al percentatge de Iimfòcits T gamma/delta detectats abans del tractament, indicant que alguns limfòcits T van perdre totalment l'expressió del TCR o que es van depleccionar. El pretractament amb V65 des del naixement, que va provocar que aquests animals no tinguessin en cap moment Iimfòcits T gamma/delta amb expressió normal del seu TCR, no va aconseguir prevenir el desenvolupament de la patologia i els animals van seguir el mateix curs inflamatori que els animals artrítics control. El tractament curatiu amb l'AcMo V65, iniciat abans del màxim d'inflamació no va aconseguir modificar el volum articular respecte al grup artrític control d'isotip i el mateix va succeir amb la VSG. En canvi, l'AcMo R73, anti-TCR-alfa/beta, sí que mostra un efecte beneficiós, disminuint tant el volum articular com la VSG durant el tractament. El tractament curatiu iniciat durant el màxim d'inflamació tampoc va aconseguir modificar els paràmetres inflamatoris ni la VSG propis de les rates artrítiques, en cap de les dosis assajades. Tot i la manca d'efecte curatiu de l'AcMo V6S observada en les variables estudiades quan el tractament es va iniciar abans del màxim d'ínflamació, es va observar un grau de destrucció articular significativament superior a l'observat en les rates artrítiques control en fases tardanes de la patologia. Aquest fet indica un paper protector fase-depenent dels limfòcits T gamma/delta a l'AA. Després de descartar la intervenció directa dels limfòcits T gamma/delta en la patogènesi del procés artrític experimental, es va centrar l'atenció cap als limfòcits T alfa/beta, concretament cap a la població limfocítica CD4+ i la CD8+. Per estudiar la implicació d'aquestes dues poblacions limfocítiques en el desenvolupament de l'artritis, es va realitzar una immunoteràpia durant el període de latència, emprant l'AcMo anti-CD4 W3/25, a dosi de 3 mg, l'AcMo anti-CD8 OX8 a dosi d'1 mg i ambdós AcMo conjuntament. Durant el tractament amb els AcMo W3/25 i OX8 es van estudiar també els seus efectes a nivell cel.lular per citometria de flux. L'administració de l'AcMo anti-CD4 W3/25 va produir la down-regulation dels limfòcits T CD4+, mentre que l'administració de l'AcMo OX8 va produir la deplecció dels limfòcits T CD8+ de sang perifèrica. L'administració de l'AcMo anti-CD4 W3/25 durant el període de latència administrat sol o conjuntament amb l'AcMo OX8, va inhibir el desenvolupament del procés inflamatori de l'AA, fins i tot després d'una segona inducció de la patologia, fet que confirma el paper essencial dels limfòcits T CD4+ en la patogènesi de l'AA. En canvi, l'administració de l'AcMo anti-CD8 no va modificar el curs de l'artritis, seguint els animals tractats amb aquest AcMo un curs similar al grup artrític control, la qual cosa indica que els limfòcits T CD8+ no intervenen directament ni exerceixen un paper regulador sobre els limfòcits T CD4+ en la patogènesi de l'AA. Com a últim protocol terapèutic i amb el fi de conèixer la implicació dels limfòcits T CD4+ i els CD8+ en la perpetuació de l'AA, es va realitzar una immunoteràpia amb els mateixos AcMo que en l'estudi anterior però iniciant la teràpia el dia 14 postinducció. un cop l'artritis ja està establerta. En aquest estudi es va disposar també d'un grup tractat amb W3/25, un grup tractat amb OX8 i un grup tractat amb ambdós AcMo conjuntament. El tractament amb l'AcMo OX8 no va aconseguir modificar el procés inflamatori ja existent. D'altra banda, el tractament amb W3/25 sol o conjuntament amb l'anticòs OX8 va ser capaç de revertir el procés inflamatori, fet que indica una implicació directa dels limfòcits T CD4+ en la perpetuació de l'AA. Aquest efecte, però, va ser transitori, ja que va desaparèixer després de 6 dosis. Aquest fet es pot atribuir al desenvolupament d'anticossos contra les 1g de ratolí administrades. que es van detectar en els animals tractats amb W3/25. A l'avaluar els nivells d'anticossos anti micobacteri desenvolupats pels diferents grups de l'estudi, cal destacar que ¡'administració de l'AcMo OX8 administrat sol va produir nivells 4 vegades superiors al dels altres grups i que van ser elevats durant tot l'estudi, el que suggereix que els limfòcits T CDS5+ tenen un efecte regulador sobre les cèl.lules responsables de la resposta humoral dirigida contra el micobacteri. En resum, en aquest treball s'ha demostrat la implicació dels limfòcits T CD4+ o col.laboradors no només en la fase de desenvolupament del procés artrític. sinó també en el procés de cronificació, fet que permet considerar els limfòcits T CD4+ com a possibles dianes d'un tractament en l'AR humana. Cal tenir en compte, però, que aquest tractament s'ha de realitzar de forma contínua i amb molècules que no estimulin una resposta immunitària. A més a més, s'ha demostrat que els limfòcits T gamma/delta juguen un paper secundari en el desenvolupament de l'AA i que aquest paper és més aviat protector, modulant l'acció exercida per altres tipus cel.lulars en una determinada fase de la patologia. D'altra banda, els limtòcits T CD8+ no estan implicats en el desenvolupament de l'artritis, ni tan sols com a moduladors de l'acció dels limtòcits T CD4+ artritogènics. Per últim, malgrat la rellevància dels limfòcits T col.laboradors en el procés artrític, la presència d'aquestes cèl.lules a nivell inflamatori local és mínima, suggerint un efecte regulat majoritàriament per citocines des dels òrgans limfoides.
Estudio del funcionalismo dopaminérgico en el cerebro de rata tras la administración de fármacos antagonistas de canales de calcio
(Universitat de Barcelona, 1991-04-16) Reiriz Palacios, Julia; Mahy Gehenne, Josette Nicole; Tolosa, Eduardo; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[spa] 1) INTRODUCCION: A lo largo de la última década se ha caracterizado un grupo de compuestos farmacológicos que comparten la propiedad biológica de disminuir la entrada de iones de calcio en varios tipos de células. Estas drogas han sido usadas extensamente en el tratamiento de desórdenes cardiovasculares y neurológicos.En los últimos años han aparecido trabajos basados en observaciones clínicas y datos experimentales que tratan de la existencia de una posible interferencia entre ciertos antagonistas de canales de calcio y la transmisión dopaminérgica.A pesar de varias inconsistencias, los datos revisados sugieren que los antagonistas de canales de calcio (AC) reducen la transmisión dopaminérgica. Sin embargo, ya que estos fármacos son un grupo muy heterogéneo de compuestos con estructuras moleculares diversas, la cuestión planteada es si los diversos efectos descritos son consecuencia de la inhibición del flujo transmembrana de calcio a través del canal de calcio o si algunos de ellos interfieren con la transmisión dopaminérgica por un mecanismo independiente del de la interacción con el transporte de calcio.Para intentar contestar a esta cuestión, se ha estudiado el posible efecto de la administración oral aguda y crónica de antagonistas de canales de calcio en el funcionalismo dopaminérgico en el cerebro de rata. Para ello se han estudiado los niveles de dopamina y sus metabolitos en muestras de tejido estriatal y límbico así como en líquido extracelular estriatal. 2) MATERIALES Y METÓDOS: Técnicas utilizadas: Obtención de muestras a partir de tejido cerebral y de diálisis intracerebral. El análisis de los niveles de dopamina y sus metabolitos se realizó mediante cromatografía liquida de alta eficacia con detección electroquímica. La actividad del enzima tirosina hidroxilasa se observó midiendo la velocidad de síntesis de la dopamina tras la administración de un inhibidor del enzima L-aminoácido decarboxilasa. Animales: Se utilizaron ratas macho Sprague-Dawley de un peso entre 190 y 220 gr. Se mantuvieron en un ciclo estándar de luz y oscuridad y se les permitió acceso libre a comida y agua. Anestesia: En los experimentos de estandarización de la técnica de diálisis se utilizó el tiopental® (42mg/Kg/ip). En el resto de los experimentos, hidrato de cloral (440mg/Kg/ip). Implantación estereotáxica: Las ratas anestesiadas se colocaron en un aparato David Kopf 1404. Se introdujo una fibra de diálisis en un estriado y se permitió la recuperación de la anestesia. Procedimiento de diálisis intracerebral: En los experimentos de estandarización del método se dejó pasar, al menos, un tiempo de 24 h entre la implantación quirúrgica y la diálisis. Luego los animales fueron conectados a una bomba Harvard y dializados con una solución de Ringer. En el resto de los experimentos los animales fueron conectados a una bomba CMA/100 a las 48 h de la intervención y perfundidos con liquido cefalorraquídeo artificial. Tratamientos: Se administraron AC (flunaricina, cinaricina, verapamil, nicardipina y nifedipina) por vía oral. En una primera etapa se utilizaron dosis elevadas en una única o en repetidas administraciones (10 días). Se midieron los niveles de dopamina (DA) y sus metabolitos en tejido estriatal y límbico así como la actividad estriatal del enzima tirosina hidroxilasa. En una segunda etapa las dosis fueron menores y se añadió el haloperidol con el fin de comparar efectos. La administración fue única o repetida (l8 días). En un grupo de animales se midieron los niveles de DA y sus metabolitos en tejido estriatal y límbico y en otro, en el liquido extracelular estriatal. En este grupo se observó, además, la respuesta a la despolarización con potasio y al estimulo agudo con haloperidol después del tratamiento crónico con todos los fármacos en estudio.3) RESULTADOS Y CONCLUSIONESEl método de diálisis intracerebral es adecuado para el estudio de los cambios en la DA y sus metabolitos en el espacio cxtracelular siempre que se utilice pasadas las 24 h de la implantación y antes de los 4 días de la misma. Permite estudiar la actividad de las terminales dopaminérgicas en su propio medio así como su comportamiento en el tiempo tras la administración de diversos fármacos.Los AC que poseen un radical fenilalquilamina en su molécula presentan un mecanismo de acción similar al de los neurolépticos.El aumento en los niveles extracelulares de DA o sus metabolitos tras la administración crónica de varios de los fármacos empleados, que en algunos de los casos resulta potenciado por la despolarización, sugiere una dificultad en el mecanismo de recaptación de DA causada por los AC. El bloqueo de los canales de calcio de tipo L por el tratamiento crónico con los AC no disminuye la respuesta a la despolarización con potasio lo que apoya la idea de que este tipo de canales no participa en la entrada de calcio necesaria para la liberación de DA. El estimulo sobreañadido de haloperidol a una administración repetida de los diversos fármacos da lugar a una respuesta menor que la producida por una única dosis del mismo, lo que indica una disminución del encendido de las neuronas dopaminérgicas provocada por el tratamiento crónico con haloperidol o con AC.Por todo lo anterior se puede concluir que el tratamiento con fármacos antagonistas de los canales de calcio produce una afectación en el funcionalismo dopaminérgico.
Purificación de una actividad HMG-CoA reductasa fosfatasa tipo 1 de la fracción microsomal de hígado de rata
(Universitat de Barcelona, 1989-05-18) Asins Muñoz, Guillermina; García Hegardt, Fausto; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[spa] El enzima hidroxi-3-metil-glutaril coenzima A reductasa (HMG-CoA reductasa) es el principal enzima regulador de la vía de síntesis del colesterol. Al igual que otros muchos enzimas, éste intercambia sus estados inactivo o activo por fosforilación / desfosforilación reversible, dependiendo su nivel de actividad del grado de fosforilación. En estudios "in vitro" se ha demostrado que en el mecanismo de fosforilación reversible intervienen HMG-CoA reductasa quinasas y HMG-CoA reductasa fosfatasas, tanto de origen microsomal como citosólico. Nuestro objetivo ha sido profundizar en la caracterización y purificación de las protein fosfatasas localizadas en microsomas de hígado de rata, en especial la actividad fosfatasa, que a lo largo de este trabajo denominaremos HMG-CoA reductasa fosfatasa M, ya que presenta un comportamiento cromatográfico que la diferencia de otras protein fosfatasas descritas. Los resultados obtenidos en el subfraccionamiento celular, en el fraccionamiento cromatográfico y la caracterización enzimática de la actividad HMG-CoA reductasa fosfatasa apoyan las siguientes conclusiones: 1.- El estado nutricional de las ratas no modifica la actividad total HMG-CoA reductasa fosfatasa presente en el sobrenadante postrnitocondrial de hígado. La actividad no se ve modificada por ayuno prolongado ni por la administración de glucagon. 2.- El tratamiento con glucagon determina la redistribución de la actividad, la actividad HMG-CoA reductasa fosfatasa asociada a microsomas disminuye significativamente. 3.- El subfraccionamiento por centrifugación a 100.000 xg del sobrenadante postmitocondrial, obtenido de ratas alimentas, provoca la precipitación de una parte (aproximadamente el 15%) de la actividad HMG-CoA reductasa fosfatasa inicial. Esta actividad se distribuye a partes iguales entre microsomas y precipitado de glucógeno. 4.- La actividad presente en microsomas no se debe a contaminación por proteínas de origen citosólicas. 5.- La actividad presente es microsomas no se debe a contaminación por proteínas procedentes del precipitado glucógeno-proteico ya que: a) tiene afinidad por el glucógeno; b) las pautas de solubilización son distintas para microsomas y glucógeno; c) cuando se intenta la purificación de la actividad HMG-CoA reductasa fosfatasa a partir de glucógeno siguiendo la misma metodología que la empleada para la HMG-CoA reductasa fosfatasa M se pone de manifiesto un comportamiento cromatográfico diferenciador entre las muestras procedentes de glucógeno y las de microsomas. 6.- La distribución de PrP sobre sustrato HMG-CoA reductasa, tras la centrifugación en un gradiente de sacarosa permite concluir que existe una actividad localizada en rnicrosomas. 7.- La actividad presente en microsomas puede solubilizarse con tratamientos suaves (detergentes no aniónicos a baja concentración o tratamiento con sales a baja molaridad) sin que queden cantidades significativas en el precipitado final, lo que indica que la proteína responsable de la actividad fosfatasa no es una proteína intrínseca de membrana. 8.- En microsomas están presentes tres actividades proteína fosfatasa sobre sustrato HMG-CoA reductasa: PrP 1, PrP 2A y PrP 2C. No se detecta actividad PrP 2B en microsomas. 9.- Se purifica la actividad HMG-CoA reductasa fosfatasa M a partir de microsomas solubilizados con detergente. La preparación final presenta un peso molecular aparente de 85 kDa en gel filtración. 10.- La actividad HMG-CoA reductasa fosfatasa M en presencia de 0.5 M KCl se disocia produciendo dos subunidades: una con actividad catalítica que presenta un peso molecular de aproximadamente 55 kDa, tanto en gel filtración como en geles de acrilamida/SDS y otra de menor peso molecular que es la subunidad de anclaje al retículo endoplasmático. 11.- El enzima HMG-CoA reductasa fosfatasa M no es específico para el sustrato HMG-CoA reductasa. De forma inversa el sustrato HMG-CoA reductasa puede ser desfosforilado por las cuatro serin protein fosfatasas hasta ahora descritas: PrP 1, 2A, 28 y 2C. 12.- La actividad HMG-CoA reductasa fosfatasa M se clasifica como PrP 1, al ser inhibida por el inhibidor 2 y al mismo tiempo no ser activable por protamina. Son necesarias para su inhibición mayores concentraciones que las descritas para la PrP 1 citosólica. 13.- La rotura del holoenzima de 85 kDa, o de la subunidad de 55 kDa, por precipitación con acetona o por proteolísis controlada con tripsina, provoca la aparición de una actividad protein fosfatasa de peso molecular en cromatografía de gel filtración de 35-37 kDa. 14.- La obtención del fragmento de 35-37 kDa conlleva en todas las ocasiones pérdida de la actividad HMG-CoA reductasa fosfatasa que no se recupera por tratamientos posteriores. 15.- Vistas las conclusiones anteriores, el enzima HMG-CoA reductasa fosfatasa M, purificado y parcialmente caracterizado a partir de microsomas de hígado de rata, tiene un comportamiento que lo distingue de otras PrP descritas. Es de origen microsomal y no se debe a contaminación por glucógeno o citesol. Está constituido por una subunidad de anclaje y otra con actividad catalítica. En su constitución no interviene el modulador o inhibidor 2 si bien lo reconoce y es inhibida por él.
Purificació i caracterització de dos proteïnes inhibidores termoestables de l'activitat HMG-CoA reductasa fosfatasa de fetge de rata
(Universitat de Barcelona, 1988-12-16) Serra i Cucurull, Dolors; García Hegardt, Fausto; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[cat] La síntesi de colesterol es veu regulada principalment per l'enzim 3-hidroxi-3-metilglutaril coenzim A reductasa o HMG-CoA reductasa. L'HMG-CoA reductasa està sotmesa a nombrosos mecanismes que li'n regulen tant la quantitat com l'activitat. Aquests mecanismes es classifiquen en dos grups, els que actuen a llarg plaç regulant fonamentalment la quantitat de l'enzim i actuant a nivell de la síntesi i degradació d'aquest, i els que actuen a curt plaç controlant-ne l'activitat. El segon tipus de regulació a curt plaç es du a terme principalment a través d'un mecanisme de fosforilació i desfosforilació reversible. En l'esquema de regulació de l'HMG-CoA reductasa de molts altres sistemes interconvertibles per fosforilació, cada proteïna fosfatases en la regulació del sistema subjecte a vegada més, es dona una major importància al paper de les proteïna fosfatases en la regulación del sistema subjecte a interconversió. Aquest fet condueix al plantejament de l'existència d'altres proteïnes, com ho són les proteïnes inhibidores que regulen, a la vegada, l'actuació de les proteïna fosfatases. L'objectiu principal d'aquesta Memòria fou, per tant, aprofundir en el conêixement del control del procés d'activació per fosforilació covalent de l'HMG-CoA reductasa, mitjançant l'estudi dels Inhibidors de proteïna fosfatases. Des de l'any 1976, es coneix l'existència de dues proteïnes Inhibidores de fosfatasa tipus 1, l'inhibidor 1 i l'inhibidor 2. Tots aquests estudis han estat realitzats fonamentalment sobre el sistema fosforilasa fosfatasa, per tant ens plantejarem fer un estudi d'aquests inhibidors en el sistema reductasa fosfatasa ja que l'HMG-CoA reductasa és també un enzim regulable per un procés de fosforilació reversible. EIs resultats obtinguts d'aquest estudi demostren l'existència de dos inhibidors de proteïna fosfatases emprant HMG-CoA reductasa com a substrat. El primer d'ells, que inhibeix l'activitat reductasa fosfatasa de la fosfatasa tipus 1, ha estat purificat a homogeneïtat a partir de citosol de fetge de rata. Aquest inhibidor te un pes molecular aparent d3 45 Kd determinat per filtració molecular en gel de 31 Kd determinat per electroforesi en gel d'acrilamida-SOS. L'estudl previ de la distrlbució subcel.lular d'aquest inhibidor de la fosfatasa tipus 1 i substrat HMG-CoA reductasa mostrà que el 90% de l'activitat inhibitòria total està localitzada en la fracció citosòlica. Aquest inhibidor presenta una gran reSsistència al calor i a tractaments àcids, a la vegada que mostra una gran sensibilitat a la tripsina i a l'etanol. L'inhibidor de la fosfatasa 1 inhibeix a la fosfatasa de tipus 1 a concentracions nanomolars, mentre que inhibeix a la fosfatasa 2A a concentracions micromolars, tant si el substrat emprat és I'HMG-CoA reductasa com si es tracta de la glicogen fosforilasa. Aquest comportament cinètic és similar al que presenta l'inhibidor-2 de múscul esquelètic de conill. L'inhibidor de la fosfatasa 1 és capaç de formar complexes inactius d'alt pes molecular de fosfatasa tipus 1. Aquests complexes són reactivables quan se'ls incuba en presència de GSK-3 i ATP-Mg. Aquest inhibidor és fosforilable per acció de la proteïna quinasa dependent d'AMP cíclic i [gamma-(32)P]ATP i Mg(2)+ i per l'acció de la GSK-3 i [gamma-(32)P]ATP i Mg(2)+. L'anàlisi del conjunt de resultats indica l'existència d'una gran similitud en el comportament cromatogràfic, electroforètic, cinètic, etc. entre l'inhibidor de la fosfatasa 1 I l'inhibldor-2 ja descrit de múscul esquelètic de conill, i ens permet afirmar que ambdos inhibidors són similars. El segon inhibidor purificat a homogenertat a partir de fetge de rata inhibeix l'activitat reductasa fosfatasa de la fosfatasa tipus 2A i presenta un pes molecular aparent de 30 Kd quan es determina per filtració en gel i de 20 Kd quan es determina per electroforesi en gel d'acrilamida-SDS. L'activitat inhibitòria sobre la fosfatasa tipus 2A està localitzada en la fracció citosòlica i presenta també una gran resistència al calor i a tractaments àcids, a la vegada que mostra una gran sensibilitat a la tripsina i a l'etanol. Aquest inhibidor inhibeix la fosfatasa 2A a concentracions nanomolars, mentre que no inhibeix la fosfatasa de tipus 1, quan el substrat emprat és l'HMG-CoA reductasa. Si el substrat és la glicogen fosforilasa cap d'ambdues activitats fosfatàsiques es veuen inhibides. L'inhibidor da la fosfatasa tipus 2A no és fosforilable ní per GSK-3 ni per la quinasa dependent d'AMP cíclic. L'anàiisi del conjunt de resultats indica que l'inhibidor de la fosfatasa 2A és un inhibidor especlfic de l'activitat reductasa fosfatasa no descrit fins ara.
Estudio de la regulación del metabolismo hidrocarbonado durante la regeneración hepática
(Universitat de Barcelona, 1992-02-13) Rosa López, José Luis; Bartrons Bach, Ramon; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[cat] Durante la regeneración hepática el contenido de fructosa 2,6-bisfosfato, Fru-2,6-P(2) disminuyó rápidamente (1 h) manteniéndose los niveles bajos durante las primeras 24 h. A partir de este tiempo, los niveles tendieron a recuperarse sin alcanzar los valores control a los 7 días. El contenido de glucógeno mostró un perfil similar siendo la disminución inicial menos rápida (mínimo a las 6 h) y restableciéndose el contenido a los 7 días. Los bajos niveles de Fru-2,6-P(2) después de una hepatectomía parcial correlacionan con el incremento de la gluconeogénesis y la disminución de la glucolisis descritos. Posiblemente la causa de la rápida disminución del contenido de Fru-2,6-P(2) después de una hepatectomía parcial sea la fosforilación del enzima por la proteína quinasa dependiente de cAMP como así lo sugiere la rápida disminución de la actividad PFK-2 activa (que representa la actividad quinasa de la forma no fosforilada del enzima bifuncional 6-fosfofmcto 2-quinasa/fructosa 2,6-bisfosfatasa, PFK-2/FB/Pasa-2) y del cociente de actividades PFK-2 activa/total (reflejo del grado de fosforilación del enzima bifuncional). Otros factores como la disminución del contenido de hexosas 6-fosfato y el aumento de citrato y fosfoenolpiruvato podrían también contribuir al mantenimiento de estos bajos niveles.Durante el proceso regenerativo aparece una forma del enzima bifuncional diferente a la del enzima de hígado adulto como lo indica su comportamiento cinético frente al glicerol 3-fosfato y a la incubación con la proteína quinasa dependiente de cAMP. El diferente reconocimiento de esta forma enzimática con anticuerpos específicos de la PFK-2/FBPasa-2 de hígado y con anticuerpos contra toda la proteína sugiere que tiene su extremo amino modificado. Durante todo el proceso proliferativo el ARNm que se expresa es específico de hígado por lo que la modificación del extremo amino no es debida a un alternativo "splicing" del gen sino a alguna modificación post-transcripcional aún no descrita para este enzima.Los niveles de ARNm del enzima bifuncional disminuyeron rápidamente después de una hepatectomía parcial con un mínimo a las 6 h y aumentando después de este tiempo con un máximo a las 48-60 h, y tendiendo a normalizarse después de este tiempo. Estos niveles de ARNm estuvieron regulados a nivel transcripcional, no correlacionando las variaciones del contenido de ARNm con variaciones en el contenido del enzima. La velocidad de degradación del ARNm del enzima bifuncional no se modificó durante las primeras horas después de una hepatectomía parcial sugiriendo un papel mis importante de la regulación transcripcional durante esta fase.Los niveles de ARNm de los enzimas considerados reguladores de la glucolisis/gluconeogénesis: glucoquinasa (GK), piruvato quinasa (L-PK), fructosa 1,6-bisfosfatasa (FBPasa-1) y fosfoenolpiruvato carboxiquinasa (PEPCK) fueron analizados por "Northern blot". En general, durante la fase pre-replicativa (0-12 h) se observa una disminución del contenido de ARNnl de los enzimas glucolíticos y aumento del de PEPCK. Esta correlación se rompe durante la fase replicativa (>12 h) donde se aprecia la recuperación del mensajero de GK (24 h), junto con elevados niveles de PFK-2FBPasa-2 y PEPCK. El contenido del mensajero de la LPK se recuperó a los 7 días, mientras que los niveles de FBPasa-1 no se modificaron significativamente durante todo el proceso regenerativo. El contenido de ARNm de estos enzimas también fue analizado en los animales laparotomizados y, aunque mostraron algunas modificaciones, éstas fueron mucho menos pronunciadas que en los animales hepatectomizados, normalizándose alrededor de las 24 h.La administración de glucagón intraperitonealmente (1 mg/kg) produjo sobre el sistema de la Fru-2,6-P(2) (metabolito, enzima, mensajero) una situación similar a la detectada durante las primeras horas después de una hepatectomía parcial. Así se observó una disminución del contenido de Fru-2,6-P2 en paralelo a la fosforilación del enzima. La actividad PFK-2 total y el contenido de ARNm también disminuyeron. Los niveles de ARNm estuvieron regulados a nivel transcripcional observándose una disminución de la velocidad de transcripción del gen en paralelo al contenido del ARNm. Sorprendentemente, la estabilidad del ARNm del enzima bifuncional aumentó en presencia de glucagón sugiriendo que quizás las vidas medias de losARNm estimadas mediante este procedimiento "in vitro" no reflejen las vidas medias reales "in vivo". Esta estabilización de los niveles de ARNm en presencia de glucagón también ocurrió para la L-PK y la PEPCK. La estabilización de los ARNm se modificó en presencia de cicloheximida, un inhibidor de la síntesis de proteínas, sugiriendo todos estos datos que en la estabilización de estos ARNm están involucradas proteínas con un recambio rápido y reguladas por un proceso dependiente de cAMP.
Procesado de secuencias dinámicas en medicina nuclear
(Universitat de Barcelona, 1992-12-16) Pavía Segura, Javier; Ros Puig, Domènec; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[spa] El uso de los ordenadores en Medicina Nuclear ha permitido la cuantificación de exploraciones, sobre todo las dinámicas. Debido a la gran cantidad de información presente en estos estudios es preciso efectuar una compresión de estos datos, de forma que hagan más fácil su interpretación. Una de las formas de reducción consiste en la obtención de imágenes paramétricas. El objetivo de este trabajo se centra en analizar la utilidad de estas imágenes paramétricas para la cuantificación de estudios dinámicos en tres aplicaciones. La primera aplicación es en los estudios de perfusión miocárdica que se utilizan para evaluar la irrigación del miocardio cuando se sospecha la existencia de enfermedad coronaria. En estos estudios se registran imágenes de esfuerzo y de redistribución, e interesa cuantificar la diferencia entre ambas. Nuestro objetivo fue cuantificar las diferencias entre las imágenes de esfuerzo y reposo por medio de una imagen paramétrica de “washout”, para lo cual es necesario eliminar la actividad extracardíaca y superponer ambas imágenes. Para comprobar la eficacia de diferentes métodos utilizables, se diseñó un modelo simulado por computador que incluía miocardio, fondo y posibles artefactos, a los que se les añadió un ruido. Se simularon imágenes de esfuerzo y reposo con cambios controlados en su distribución. Para efectuar la estimación del fondo se probaron diversos métodos de interpolación. Las pruebas realizadas demuestran que el método de Watson modificado es el que tiene el mejor comportamiento. Para alinear las imágenes de esfuerzo y redistribución de forma automática, probamos diversos algoritmos basados en la correlación. La correlación bidimensional restringida a la zona de mayor captación del miocardio, utilizando pixels alternos, se muestra como un método capaz de alinear las imágenes de esfuerzo y redistribución con suficiente precisión. Una vez efectuado el alineamiento de las imágenes se calculé la imagen paramétrica de “washout”. La cuantificación por medio de los valores medios en los diversos sectores estudiados, da resultados acordes con los teóricos. El método se aplicó sobre casos reales, obteniendo resultados concordantes con la patología. De esta parte se concluye que el método formado por la sustracción de fondo, la alineación de las imágenes y la construcción de la imagen paramétrica de “washout” es factible para la cuantificación de estudios planares de perfusión miocárdica. La segunda aplicación es sobre la ventriculografía isotópica en equilibrio, que es una exploración que permite estudiar el contenido de las cavidades ventriculares a lo largo del ciclo cardiaco, permitiendo estudiar el funcionalismo ventricular. Ha sido muy difundida la utilización de imágenes paramétricas de amplitud y fase del primer armónico del desarrollo de Fourier, que proporcionan información sobre la contractilidad y el sincronismo cardiaco. En este trabajo proponemos la utilización de dos armónicos para obtener nuevas imágenes paramétricas que reflejen las distintas fases del ciclo cardiaco. Estas corresponden a los parámetros: amplitud, tiempo de telesistole, fracción de eyección, máximas velocidades de vaciado y llenado y tiempos en los que se producen, además de una cuantificación utilizando el valor medio y desviación estándar de los valores de los parámetros en cada ventrículo. Los objetivos planteados fueron implementar el método compararlo con el estándar de un armónico. Se ha aplicado el método a un grupo formado por 13 voluntarios sanos, 10 hombres y 3 mujeres, lo que nos ha permitido estimar el rango de normalidad de los distintos parámetros en cada ventrículo. Los valores medios y desviaciones estándar de estos parámetros son distintos en los dos ventrículos. También se ha encontrando que los valores de tiempo de telesistole obtenidos con uno y dos arménicos son significativamente distintos siendo más altos y más dispersos, los obtenidos con un armónico. Las imágenes paramétricas calculadas mediante dos armónicos son más uniformes, existiendo diferencias significativas con los valores obtenidos mediante un armónico. El método también fue aplicado en varios sujetos con patología. En conjunto, puede concluirse que el método propuesto utilizando dos armónicos obtiene unos parámetros capaces de discriminar diversas patologías, siendo de utilidad para el estudio del funcionalismo cardíaco. La última aplicación es en los estudios de motilidad ciliar los cuales sirven para estudiar el comportamiento de los cilios de las mucosas que recubren las vías respiratorias. Su misión es transportar las partículas que se hayan depositado sobre ellos, hacia el exterior, a través de la boca. La velocidad con que estos cilios transportan estas partículas es importante ya que se ha observado que los enfermos con afección de las vías respiratorias presentan una disminución de esta capacidad protectora. Se ha desarrollado un método que permite cuantificar la velocidad de transporte en cualquier parte de la trayectoria. El método puede aplicarse los dos epitelios ciliadas que se encuentran en el organismo humano, corno son la mucosa nasal y la bronquial. Un conjunto de 14 sujetos normales voluntarios fue estudiado por esta técnica. El promedio de la velocidad media, en este grupo fue de S.3±1.4 mm/min. También se estudió un grupo de 16 laringectomizados, obteniendo un valor de 3.6±1.2 mm/min. La diferencia significativa hallada (p<0,005) demuestra que, en las personas laringectomizadas, se produce una alteración en la función de transporte probablemente l por atrofia de la mucosa nasal. El método implementado permite cuantificar con precisión la velocidad de transporte incluso en las diferentes partes del trayecto, pudiendo detectar zonas con motilidad ciliar anómalas por lo que puede ser de utilidad en el diagnóstico.
Altitud y riesgo neurológico: alpinistas europeos versus sherpas del Himalaya
(Universitat de Barcelona, 1997-06-26) Garrido Marín, Eduardo; Ventura i Farré, Josep Lluís; Segura Cardona, Ramón; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[spa] La exposición humana a grandes altitudes puede provocar diversos grados de deterioro funcional y orgánico, presentando el sistema nervioso una gran sensibilidad frente a cambios en la presión parcial de oxígeno.Mediante una historia clínica especialmente confeccionada, exploración física neurológica y resonancia magnética (RMI) craneal se estudió a varios grupos de alpinistas de élite que hubieran escalado por encima de los 7.000 m. de altitud en utilizar equipos de oxígeno en una ocasión como mínimo. Éstos fueron comparados (en diferentes fases de estudio) contra ellos mismos, con un grupo de nativos del Himalaya de la etnia Sherpa que poseían un historial excepcional en cuanto al número de ascensos a montañas mayores de 8.000 m. y con un grupo control que nunca había sobrepasado los 2.500 m. de altitud.Mientras todas las exploraciones físicas fueran normales, prácticamente todos los alpinistas presentaron clínica de orden neuropsicológico a gran altitud y el 44-58% también tras las expediciones, mostrando el 46-61% alteraciones RMI cerebrales (atrofia cortical y/o leucoaralosis preferentemente posteriores). En ningún sujeto del grupo control se detectó cambios RMI y tan sólo el 14% de Sherpas presentó clínica neurológica y cambios RMI similares. Las diferencias respeto a la aparición de alteraciones RMI cerebrales fueron altamente significativas entre haber o no sido expuesto a grandes altitudes, así como entre ser nativo del Himalaya o de nivel del mar. No hubo correlación estadísticamente significativa entre las imágenes RMI patológicas y la edad, la sintomatología, el número de ascensiones superiores a 7.000 y 8.000 m., el tiempo de exposición a gran o extrema altitud y la máxima cota alcanzada. No obstante, parece haber una relación entre la tolerancia a la altitud extrema y a la aparición de alteraciones RMI, entre el tiempo transcurrido desde la última escalada superior a 8.000 m. y la presentación de atrofia cortical, entre el sexo femenino y la menor frecuencia de RMI alteradas. Ascender a grandes alturas, no necesariamente extremas, provoca la aparición de sintomatología neuropsicológica y alteraciones en la imagen de la estructura cerebral en un elevado porcentaje de humanos de nivel de mar pero no en los nativos del Himalaya estudiados. Esta supuesta protección étnica frente a la hipoxia ambiental puede justificarse por la existencia de peculiares adaptaciones, especialmente del metabolismo aeróbico, derivadas de una permanencia crónica bajo presiones barométricas notablemente reducidas. Los hallazgos detectados por RMI sugieren la presencia de lesión degenerativa, no obstante, permanece desconocido su predominio cerebral posterior, así como su evolución e implicación clínica a largo plazo.
Ritmos circadianos y deporte. Estudio de las oscilaciones circadiarias del rendimiento y de algunos de los factores que las afectan
(Universitat de Barcelona, 1994-07-08) Javierre Garcés, Casimiro F.; Ventura i Farré, Josep Lluís; Universitat de Barcelona. Departament de Ciències Fisiològiques Humanes i de la Nutrició
[spa] Los ritmos biológicos se han revelado como de gran importancia debido a su trascendencia sobre distintas variables fisiológicas. Del mismo modo se han demostrado de cierta importancia en el rendimiento deportivo. Por eso se propuso el siguiente estudio, buscando los siguientes objetivos: 1. Determinar la ritmicidad circadiaria del rendimiento en velocidad, mediante un test de 80 metros. También en natación mediante un test de 25 metros estilo libre. 2. Intentar modificar los picos de rendimiento mediante maniobras sencillas, como son la modificación del horario de sueño y de comidas. 3. Utilizar la autorritmometría como método para controlar diversas variables que puedan delatar el momento en el que se producen los picos de rendimiento. De los distintos trabajos que componen el estudio se podría concluir que: 1. El rendimiento en velocidad presenta una oscilación a lo largo del día, existiendo un pico de rendimiento por la tarde (alrededor de las 19 horas) y un deterioro en el nivel de las marcas obtenidas en el control de las 15 horas. 2. Dicha ritmicidad puede ser modificada con maniobras sencillas como variar el horario de sueño y comidas de forma conjunta, lográndose un adelanto o retraso de los picos de rendimiento en el sentido deseado. Este hecho sería importante dado que se han logrado mejorías de alrededor del 3% para dichos momentos de mejor rendimiento y que dicha alteración se logra con maniobras sencillas como las ya comentadas. Al mismo tiempo, debe tenerse en cuenta que estas mejorías -del 3%- son superiores a las producidas por muchos entrenos en atletas de elite y pueden condicionar grandamente el resultado en campeonatos. 3. Existiría la posibilidad de detectar los momentos de máximo rendimiento utilizando variables sencillas (temperatura, test de autoestima) a medir por el propio sujeto mediante autorritmometría, siendo aconsejable el utilizarlas en conjunto a fin de lograr la máxima precisión en la exploración. 4. Existe también una ritmicidad circadiaria del rendimiento en natación (25 metros libres), encontrándose el pico de rendimiento ligeramente retrasado respecto al encontrado en la carrera de velocidad (20'30). 5. El entrenamiento actúa como un elemento capaz de alterar la ritmicidad circadiaria del rendimiento, así como de alguna variable fisiológica como la temperatura. Por ellos a la hora de realizar cambios bruscos en los horarios de entrenamiento para adecuarse a los de la competición estos deberían hacerse con bastante tiempo de antelación y teniendo en cuenta que al menos una semana después de haber vuelto al horario habitual aparecen alteraciones en la ritmicidad de la temperatura y del rendimiento. Dado lo anterior propondríamos realizar cambios poco bruscos en los horarios o mantener el mismo horario de entrenamiento pero añadiendo una sesión mínima coincidente con las horas a las cuales se vaya a realizar dicha competición. En resumen, creemos que la cronobiología y, en concreto, el estudio de los ritmos circadianos puede ser un factor más a tener en cuenta a la hora de intentar alcanzar un mejor rendimiento, existiendo algunas respuestas para algunas de las preguntas que nos planteamos al inicio del estudio pero, al mismo tiempo, evidenciándose la necesidad de continuar investigando con el fin de intentar conseguir un conocimiento más completo sobre el tema.

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